文献类型：学位论文

中文题名：基于NF-κB信号通路探讨解郁安神方联合硒对CUMS小鼠的抗抑郁作用机制

作者：王元元[1];

第一作者：王元元

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：黄生辉;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：网络药理学;解郁安神方;硒;NF-κB信号通路;CUMS

年份：2024

摘要：目的:建立慢性应激抑郁模型小鼠,观察解郁安神方联合硒对小鼠行为学、海马组织,5-TH、DA和NF-κB信号通路的影响,并对网络药理学预测靶点进行实验验证,探讨解郁安神方联合硒的抗抑郁作用机制。方法:1.通过中药药理学数据库分析平台(TCMSP)及查阅国内外文献获取解郁安神方药物主要活性成分及活性成分的作用靶点,从Genecards、OMM、Pharm Gkb数据库获取抑郁症(Depression,DP)的主要作用靶点;利用微生信网站筛选出解郁安神方与DP的共同靶点;利用STRING进行PPI分析,构建PPI网络;使用Metascape平台进行GO和KEGG分析,运用Cytoscape3.9.0软件构建“药物活性成分-疾病-靶点”网络图。使用Auto Dock对活性成分与关键靶点进行分子对接验证。2.选取健康SPF级KM雄性小鼠70只,适应性饲养1周后按随机数字表法分为正常组12只,模型组48只,正常组常规喂养,模型组进行慢性不可预知温和应激28天后进行行为学评价,行为学测试结束后随机从正常组和造模组各选取3只小鼠,进行海马组织5-HT、DA含量的检测,以证明造模成功。3.造模成功后,采用随机数字表法将模型组小鼠分为模型组、硒组、解郁安神方组、硒+解郁安神方组、氟西汀组,每组9只,正常组和模型组予0.9%生理盐水灌胃。其余各组分别用对应药物灌胃给药,给药时间14天,给药过程中,除正常组外,其余各组继续造模至实验结束。4.灌胃14天后,进行高架十字迷宫实验、强迫游泳、悬尾实验观察小鼠行为学的变化。5.小鼠处死后取材,采用ELISA法检测小鼠海马组织IL-6、TNF-α、IL-1β、5-HT、DA的含量;免疫组化和蛋白免疫印迹法检测小鼠海马组织p-NF-κB p65、NF-κB p65、PTGS2、SelS、GPX4蛋白表达情况;HE染色观察脑组织海马区病理变化。结果:1.网络药理学结果通过国内外文献查阅,搜索到解郁安神方共含有228个活性化合物,预测到解郁安神方作用靶点600个,DP相关靶点3664个,解郁安神方作用于DP的靶点333个,KEGG结果显示解郁安神方干DP的相关信号通路225条,结果表明解郁安神方可能通过NF-κB信号通路、PI3K-AKT信号通路、JAK-STAT信号通路等途径干预DP。分子对接结果显示,核心活性成分山柰酚、槲皮素、β-谷甾醇、木犀草素、豆甾醇、异鼠李素、洋川芎醌、齿孔酸、18α-羟基甘草次酸、亮氨酸与靶点PTGS2具有较好的结合能力。2.行为学检测结果与正常组比较,模型组小鼠进入开臂次数、在开臂停留时间明显减少;与模型组比较,硒组、中药组、硒+中药组、氟西汀组进入开臂次数、在开臂停留时间明显增加;与氟西汀组比较,硒组在开臂停留时间减少。强迫游泳、悬尾实验中,与正常组相比,模型组不动时长明显增加;与模型组比较,中药组、硒+中药组、西药组不动时长明显减少;与西药组相比,强迫游泳实验中,硒组、中药组小鼠不动时长增加;悬尾实验中,硒组小鼠不动时长增加。3.实验检测结果(1)ELISA检测结果给药后,与正常组比较,模型组小鼠海马区5-HT、DA含量明显减少;与模型组比较,中药组、硒+中药组、西药组小鼠海马区5-HT、DA含量明显增加,硒组5-HT含量增加;与西药组比较,硒组5-HT、DA含量减少,中药组DA含量减少。给药后,与正常组比较,模型组小鼠海马区IL-1β、TNF-α、IL-6含量增加;与模型组比较,硒组、中药组TNF-α、IL-6含量减少,中药组硒+中药组、西药组小鼠海马区IL-1β、TNF-α、IL-6含量明显减少;与西药组比较,硒组IL-1β、TNF-α、IL-6含量增加,中药组IL-1β、TNF-α含量增加。(2)WB检测结果给药后,与正常组相比,模型组NF-κBp65、p-NF-κBp65、PTGS2蛋白表达升高,SelS和GPX4蛋白的表达显著降低。与模型组相比,硒+中药组、氟西汀组NF-κBp65、p-NF-κBp65、PTGS2蛋白表达显著降低,SelS和GPX4蛋白的表达升高,硒组、中药组p-NF-κBp65、PTGS2蛋白表达显著降低,NF-κBp65蛋白表达降低,GPX4、SelS蛋白的表达升高。与西药组比较,硒组、中药组及硒+中药组的GPX4蛋白表达均明显低于西药组,硒组、中药组NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白表达升高,硒组、中药组PTGS2蛋白表达升高。(3)免疫组化检测结果与正常组相比较,模型组小鼠海马区GPX4、SelS表达明显减少,p-NF-κB p65、NF-κB p65、PTGS2表达明显增加。与模型组相比,中药+硒组、西药组GPX4、SelS表达增加,西药组、中药+硒组、p-NF-κB p65、NF-κB p65、PTGS2阳性表达明显减少。硒组、中药组p-NF-κB p65表达减少,中药组PTGS2表达减少。与西药组相比,硒组GPX4、SelS表达明显减少,中药组、中药+硒组GPX4表达减少,中药组SelS表达明显减少,硒组、中药组p-NF-κB p65表达明显增加,硒组NF-κB p65、PTGS2表达明显增加。(4)HE染色结果与模型组相比,硒组、中药组、硒加中药组、西药组小鼠海马区形态改善,神经细胞数量明显增多,细胞核染色明显,细胞排列紧密。结论:本研究通过网络药理学,对解郁安神方改善DP的活性成分与靶点进行了分析与预测,并采用分子对接进行验证,初步揭示了解郁安神方多成分、多靶点的协同抗抑郁作用特点。进一步实验研究发现解郁安神方联合硒可以改善CUMS小鼠抑郁样行为,其机制可能与改善海马组织的病理形态,抑制NF-κB通路的激活,降低下游炎症因子的大量产生,同时增加海马组织5-TH、DA的含量有关。