文献类型：期刊文献

中文题名：慈菇消脂丸含药血清对L-02细胞脂肪变模型自噬的干预研究

作者：尹硕[1];毛舒婷[1];王莉[1];王爱娣[1];赵秀萍[1];马燕花[1]

第一作者：尹硕

机构：[1]甘肃中医药大学第一临床医学院,甘肃兰州730000

第一机构：甘肃中医药大学临床医学院

年份：2022

卷号：33

期号：5

起止页码：1036

中文期刊名：时珍国医国药

外文期刊名：Lishizhen Medicine and Materia Medica Research

收录：北大核心:【北大核心2020】；CSCD:【CSCD_E2021_2022】；

基金：国家自然科学基金(81560753,81860821)。

语种：中文

中文关键词：自噬;脂肪变性;L-02细胞;慈菇消脂丸;

摘要：目的探究L-02细胞NAFLD模型中自噬相关基因JNK1和Beclin1的表达及慈菇消脂丸含药血清的干预作用。方法体外培养L-02细胞,不同浓度FFA(OA∶PA=2∶1)干预,CCK-8试剂盒检测细胞活力,确定细胞最终的造模浓度。实验随机分为正常对照组(10%BSA),模型组(10%BSA+1000mmol/L FFA),中药低剂量组(10%BSA+1000mmol/L FFA+2%含药血清),中药中剂量组(10%BSA+1000mmol/L FFA+4%含药血清),中药高剂量组(10%BSA+1000mmol/L FFA+6%含药血清)。培养诱导24h,油红“O”染色观察细胞内脂滴聚集情况;免疫荧光染色观察细胞内自噬标志蛋白LC3-Ⅱ分布情况;Western blot法和Real-time PCR法检测各组JNK1和Beclin1蛋白及基因表达情况。结果(1)CCK-8试剂盒检测不同FFA浓度对细胞活性的影响:与正常对照组相比,当FFA浓度大于1000mmol/L时,对细胞活性有明显抑制作用(P<0.01)。(2)油红“O”染色和细胞免疫荧光染色:模型组细胞质中出现被油红染成红色颗粒的脂滴,正常对照组细胞质中未见红色颗粒。正常对照组中LC3-Ⅱ弥散分布在细胞质中,模型组中LC3-Ⅱ的分布呈现局部聚集现象。(3)WB检测结果:与正常对照组相比,模型组、不同浓度含药血清组Beclin1蛋白表达均显著上调(P<0.01);与模型组相比,不同浓度含药血清组Beclin1蛋白表达均显著上调(P<0.01)。与正常对照组相比,模型组、不同浓度含药血清组JNK1蛋白表达均显著上调(P<0.01);与模型组相比,不同浓度含药血清组JNK1蛋白表达均显著上调(P<0.01)。(4)RT-PCR检测结果:与正常对照组相比,模型组Beclin1基因表达上调(P<0.05),不同浓度含药血清组Beclin1基因表达均显著上调(P<0.01);与模型组相比,2%含药血清组Beclin1基因表达上调(P<0.05),4%含药血清组、6%含药血清组Beclin1基因表达显著上调(P<0.01)。与正常对照组相比,模型组、不同浓度含药血清组JNK1基因表达均显著上调(P<0.01);与模型组相比,不同浓度含药血清组JNK1基因表达均显著上调(P<0.01)。结论FFA(OA:PA=2:1)诱导的脂肪变性L-02细胞模型中有自噬现象发生,慈菇消脂丸可通过JNK1-Beclin1信号通路促进此过程中自噬水平,在发生脂肪变性的肝细胞进一步脂变中发挥保护性作用。