文献类型：学位论文

中文题名：CTRP13通过SIK1/CRTC2通路参与高糖诱导的HLSECs滤过功能障碍

作者：张娜[1];

第一作者：张娜

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：刘静;甘肃中医药大学|张琦;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：血清补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白13;盐诱导激酶1;P130Cas;肝窦内皮细胞

年份：2023

摘要：目的:探讨血清补体C1q/肿瘤坏死因子相关蛋白13(CTRP13)参与高糖诱导的人肝窦内皮细胞(HLSEC)滤过功能障碍的分子机制。方法:体外培养HLSEC,构建慢病毒CTRP13过表达载体(LV-CTRP13)并感染HLSEC,依据不同处理条件将细胞分为正常对照(5.5 mmol/L葡萄糖,NC)组、高糖(25 mmol/L,HG)组、NC+LV-CTRP13组、HG+LV-CTRP13组、NC+空载对照(LV-CON)组、HG+LV-CON组、HG+LV-CTRP13+HG-9-91-01[盐诱导激酶1(SIK1)抑制剂]组、HG+LV-CON+HG-9-91-01组、HG+LV-CTRP13+GW4064[环磷酸腺苷调节转录共激活因子2(CRTC2)抑制剂]组、HG+LV-CON+GW4064组。用CCK8检测细胞活力,采用实时荧光定量PCR(q RT-PCR)法检测实验各组细胞中CTRP13、SIK1、CRTC2、P130 Crk相关底物(P130Cas)的mRNA表达水平,用Western blotting法检测实验各组细胞中CTRP13、SIK1、p-SIK1、CRTC2、p-CRTC2、P130Cas的蛋白表达水平。采用单因素方差分析进行组间比较。结果:1.高糖干预下,肝窦内皮细胞中CTRP13、SIK1、P130Cas的mRNA和蛋白表达降低,CRTC2的mRNA和蛋白表达升高(P<0.05);与NC组相比,CTRP13、SIK1、P130Cas的mRNA降低68%、69%、79%,蛋白降低57.3%、39.2%、58.7%;CRTC2的mRNA升高12.9倍,蛋白升高1.4倍2.荧光显微镜显示:HG+LV-CTRP13组与HG+LV-CON组的细胞中有绿色荧光,HG+LV-CTRP13组的HLSECs中CTRP13、SIK1、P130Cas的表达升高,CRTC2的表达降低(P<0.05);与HG+LV-CON组相比,HG+LV-CTRP13组的HLSECs中CTRP13、SIK1、P130Cas的mRNA升高2.5倍、5.5倍、2倍,蛋白升高59.3%、51%、61.9%;CRTC2的mRNA降低49.3%,蛋白降低24.7%。3.LV-CTRP13转染增加了CTRP13、SIK1、P130Cas的表达,逆转了高糖诱导的CRTC2的高表达。与HG+CON组相比,HG+LV-CTRP13组的HLSECs中CTRP13、SIK1、P130Cas的mRNA表达升高,CTRP13、SIK1、p-SIK1、p-CRTC2、P130Cas的蛋白表达升高,CRTC2的mRNA和蛋白表达降低(P<0.05);CTRP13、SIK1、P130Cas的mRNA升高2.5倍、5.5倍、2倍,CTRP13、SIK1、p-SIK1、p-CRTC2、P130Cas的蛋白升高59.3%、51%、34.2%、20.4%、61.9%;CRTC2的mRNA降低49.3%,蛋白降低24.7%。4.HG-9-91-01(SIK1抑制剂)干预下,HG+LV-CTRP13+HG-9-91-01组的HLSECs中SIK1、P130Cas的mRNA和蛋白表达降低,p-SIK1(T182)、p-CRTC2(S171)的蛋白表达降低(P<0.05)。与HG+LV-CTRP13组相比,SIK1、P130Cas的mRNA降低45.8%、54.2%,SIK1、p-SIK1、p-CRTC2、P130Cas的蛋白降低37.8%、35.5%、19.4%、23.5%,CTRP13在HG+LV-CTRP13组和HG+LV-CTRP13+HG-9-91-01组中的表达基本一致,差异无统计学意义(P>0.05)5.GW4064(CRTC2抑制剂)干预下,HG+LV-CTRP13+GW4064组的HLSECs中CRTC2的mRNA和蛋白表达降低,P130Cas的mRNA和蛋白表达升高(p<0.05);与HG+LV-CTRP13组相比,HG+LV-CTRP13+GW4064组的HLSECs中CRTC2的mRNA降低88.1%,蛋白降低19.4%,P130Cas的mRNA升高1.1倍,蛋白升高51.5%;CTRP13、SIK1在HG+LV-CTRP13组和HG+LV-CTRP13+HG-9-91-01组中的表达基本一致,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:CTRP13、SIK1、CRTC2、P130Cas参与了高糖诱导的HLSECs滤过功能障碍,CTRP13过表达可以抑制高糖诱导的HLSECs滤过功能障碍,这一机制是通过SIK1/CRTC2通路实现的。