文献类型：学位论文

中文题名：四君子汤对脾气虚大鼠脑肠微环境中促胰液素、P物质及cAMP/PKA-CREB信号通路相关基因蛋白表达的影响

作者：李楷[1];

第一作者：李楷

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：段永强;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：脾气虚证;四君子汤;中药药理;海马组织;小肠组织;促胰液素;磷物质

年份：2018

摘要：目的：本实验研究基于“脾主运化”而为气血生化之源，“脾主升清”，“在志为思”的理论基础，拟从脾气虚大鼠脑海马和小肠组织cAMP/PKA-CREB信号通路相关基因蛋白表达角度揭示“脾主运化-在志为思”的科学内涵及四君子汤的干预效应，从而为四君子汤的应用提供理论依据。　　方法：取3月龄，体重200±20g的120只SPF级Wistar大鼠（雌雄各半），按随机数字表法分为空白对照组、脾气虚模型组、四君子汤高、中、低剂量组和自然恢复组，每组20只。除空白对照组大鼠每日上午按10ml/kg体重灌服生理盐水之外，其余大鼠同置（区分雌雄）采用综合因素法成功建立脾气虚模型并随机分为脾气虚模型组、四君子汤高、中、低剂量组和自然恢复组后，脾气虚模型组继续造模3周，四君子汤各组在继续造模同时分别按24、12、6g/kg四君子汤煎剂灌胃3周，空白对照组和自然恢复组给予等量生理盐水灌胃3周后，在评估各组大鼠的一般生存状态、脾虚宏观证候积分及血清D-木糖含量的基础上，采用Morris水迷宫实验通过定位航行及空间探索实验评估各组大鼠的空间学习记忆能力;采用酶联免疫法检测各组大鼠海马及小肠组织P物质（SP）含量和促胰液素（Sec）含量变化;采用实时荧光定量聚合酶链式反应法（RT-PCR）和蛋白免疫印迹技术（WB）检测各组大鼠海马及小肠组织cAMP/PKA-CREB信号通路中cAMP、PKA、CREB基因和蛋白相对表达量。　　结果：1.与空白对照组比较，脾气虚模型组大鼠均出现体重增加量减缓、被毛稀疏枯槁、弓背抱团、排便稀溏等症状，脾虚宏观证候积分显著升高，且血清D-木糖含量显著降低，组间差异有统计学意义（P＜0.01）。与脾气虚模型组比较，四君子汤高、中剂量组大鼠体重增加量减缓、被毛稀疏枯槁、弓背抱团、排便稀溏等症状均有较大改善，脾虚宏观证候积分显著降低，四君子汤高剂量组大鼠血清D-木糖含量显著升高，组间差异均具有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05）;四君子汤低剂量及自然恢复组大鼠体重增加量减缓、被毛稀疏枯槁、弓背抱团、排便稀溏等症状有改善趋势，脾虚观证候积分有降低趋势，四君子汤中、低剂量组与自然恢复组大鼠血清D-木糖含量虽有升高趋势，但组间差异无统计学意义（P＞0.05）。　　2.与空白对照组比较，脾气虚模型组大鼠在Morris水迷宫实验中逃避潜伏期显著升高，穿越平台次数显著降低，组间差异有统计学意义（P＜0.01）。与脾气虚模型组比较，四君子汤高剂量组大鼠逃避潜伏期显著降低，四君子汤高、中剂量大鼠穿越平台次数显著升高，组间差异均有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05）;四君子汤中、低剂量组与自然恢复组大鼠逃避潜伏期虽有降低趋势，四君子汤低剂量组与自然恢复组大鼠穿越平台次数虽有升高趋势，但组间差异无统计学意义（P＞0.05）。　　3.与空白对照组比较，脾气虚模型组大鼠海马及小肠组织P物质（SP）含量显著降低，小肠及血清促胰液素（Sec）含量显著降低，组间差异有统计学意义（P＜0.01）。与脾气虚模型组比较，四君子汤高、中剂量组大鼠海马及小肠组织SP含量显著升高，血清及小肠组织Sec含量显著升高，组间差异均有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05）;四君子汤低剂量组与自然恢复组大鼠海马及小肠组织SP含量有升高趋势，血清及小肠组织Sec含量有升高趋势，但组间差异无统计学意义（P＞0.05）。　　4.与空白对照组比较，脾气虚模型组大鼠海马及小肠组织cAMP、PKA、CREB基因和蛋白相对表达量显著降低，组间差异有统计学意义（P＜0.01）。与脾气虚模型组大鼠比较，四君子汤高剂量组大鼠海马及小肠组织cAMP、PKA、CREB基因和蛋白相对表达量均显著升高，四君子汤中剂量组大鼠海马及小肠组织PKA、CREB基因和蛋白相对表达量均显著升高，组间差异均有统计学意义（P＜0.01，P＜0.05）;四君子汤中剂量组大鼠海马及小肠组织cAMP基因和蛋白相对表达量有升高趋势，四君子汤低剂量组与自然恢复组大鼠海马及小肠组织cAMP、PKA、CREB基因和蛋白相对表达量有升高趋势，但组间差异无统计学意义（P＞0.05）。　　结论：1.四君子汤能够改善脾气虚模型大鼠脾虚症状和平均每日摄食量，降低脾虚宏观证候积分，升高血清D-木糖含量，表明四君子汤能够改善脾气虚模型大鼠的一般生存状态，并可促进脾气虚模型大鼠小肠吸收功能。　　2.四君子汤能够降低脾气虚模型大鼠逃避潜伏期、提高穿越平台次数，表明四君子汤可以提高脾气虚模型大鼠的定位航行能力及空间探索能力，改善脾气虚模型大鼠的空间学习及记忆能力。　　3.四君子汤能够升高脾气虚模型大鼠海马及小肠组织P物质（SP）、血清及小肠组织促胰液素（Sec）含量，表明四君子汤对脾气虚模型大鼠胃肠激素SP、Sec正常分泌具有调节作用。　　4.四君子汤可通过提高脾气虚模型大鼠海马组织cAMP/PKA-CREB信号通路中cAMP、PKA、CREB基因和蛋白相对表达量而改善学习记忆能力，且四君子汤改善脾气虚大鼠小肠吸收功能的作用可能与上调小肠组织cAMP、PKA、CREB基因和蛋白表达量有关。