文献类型：学位论文

中文题名：基于TLR4/NF-κB/MyD88信号通路探讨黄芪甲苷对变应性鼻炎大鼠（鼻鼽）的影响

作者：马文玲[1];

第一作者：马文玲

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：白丽君;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：黄芪甲苷;变应性鼻炎;白介素;TLR4/NF-κB/MyD88

年份：2023

摘要：目的:本研究基于TLR4/NF-κB/MyD88信号通路,应用AR大鼠的模型探讨黄芪甲苷(Astragaloside Ⅳ,AS-Ⅳ)对AR大鼠的影响,为临床治疗AR提供可靠的理论依据。方法:将30只SPF级雄性Wistar大鼠使用随机方法分为6个组,每组分为5只。分别为:空白组、模型对照组、氯雷他定组、AS-Ⅳ高剂量组、AS-Ⅳ中剂量组、AS-Ⅳ低剂量组。AR大鼠模型复刻成功后,空白组与模型对照组使用同体积的生理盐水灌胃,AS-Ⅳ高中低剂量组分别给予80 mg/kg、40 mg/kg、20 mg/kg灌胃,阳性对照组予以氯雷他定1 mg/kg灌胃。药物灌胃前后,分别观察各组大鼠的一般行为学改变。半个小时后用3%戊巴比妥钠麻醉下取心尖血并离心出血清;断头处死大鼠后取出鼻黏膜;打开胸腔取出大鼠脾脏、胸腺并分别称重,计算大鼠脾脏指数及胸腺指数;HE染色观察大鼠鼻黏膜组织学形态差异;使用酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测血清中IL-4、Ig E及TNF-α的含量;蛋白质免疫印迹法(Western Blot)检测鼻黏膜中的TLR-4、NF-κB p65及MyD88的蛋白表达情况:PCR检测鼻黏膜中的TLR-4、NF-κB p65及MyD88的m RNA的表达情况。运用Graph Pad Prism 9.3软件进行数据分析,P<0.05为差异有统计学意义。结果:1.AR大鼠的行为学变化:造模后大鼠出现明显的抓鼻、喷嚏、流清涕等症状,各治疗组用AS-Ⅳ及氯雷他定灌胃后症状逐渐好转,行为学评分均高于空白组,低于模型组(P<0.05)。2.脾脏指数:与模型组相比,氯雷他定组、AS-Ⅳ高剂量组差异具有统计学意义(P<0.05);胸腺指数:与空白组相比,模型组、氯雷他定组、AS-Ⅳ高、中、低剂量组胸腺指数均呈现升高的趋势,差异具有统计学意义(P<0.05,P<0.01),与模型组相比较,氯雷他定组、AS-Ⅳ高、中剂量组胸腺指数明显下降,差异具有统计学意义(P<0.01),AS-Ⅳ低剂量组胸腺指数下降不明显,差异无统计学意义(P>0.05)。3.观察鼻黏膜切片HE染色情况:空白组鼻黏膜无异常增厚,纤毛组织清晰可见,固有层排列整齐结构清晰可见,分界明显,未见明显杯状细胞,黏膜下层未见炎细胞的浸润,以及水肿坏死等;模型组可见黏膜层显著增厚,杯状细胞增生明显,纤毛组织破坏明显,黏膜固有层和黏膜下层大量的炎性细胞浸润;各治疗组鼻黏膜病理形态均较模型组表现良好。4.ELISA法检测血清IL-4、TNF-α及Ig E:与空白组相比,其余各组大鼠血清IL-4、TNF-α、Ig E的含量显著上升(P<0.01);与模型组相比,阳性对照组与AS-Ⅳ高、中、低剂量组大鼠血清IL-4、Ig E、TNF-α均呈现不同程度的降低(P<0.05),阳性对照组与AS-Ⅳ高剂量组之间差异无统计学意义(P>0.05)。5.Western blot法检测大鼠鼻黏膜TLR4、NF-κB p65、MyD88蛋白表达情况:大鼠AS-Ⅳ低、中、高剂量组中TLR4、NF-κB p65、MyD88蛋白表达显著降低,差异具有统计学意义(P<0.05),且随着AS-Ⅳ剂量的增加,降低程度逐渐加深(P<0.05);阳性对照组与AS-Ⅳ高剂量组之间比较,差异无统计学意义(P>0.05)。与模型组相比,氯雷他定组与AS-Ⅳ高、中、低剂量组大鼠鼻黏膜中TLR4、NF-κB p65、MyD88蛋白表达有不同程度的降低(P<0.05),其中,氯雷他定组与AS-Ⅳ高剂量组比较差异无统计学意义(P>0.05)。6.RT-PCR检测大鼠鼻黏膜组织中TLR4、MyD88、NF-κB及NF-κB p65 m RNA的相对表达水平,与空白组相比,模型组鼻黏膜的TLR4、MyD88、NF-κB及NF-κB p65m RNA相对表达水平显著上升,差异具有统计学意义(P<0.001),与模型组相比,氯雷他定组、AS-Ⅳ高、中剂量组鼻黏膜中TLR4、MyD88、NF-κB及NF-κB p65 m RNA相对表达水平显著下降,差异具有统计学意义(P<0.001,P<0.01)。结论:AS-Ⅳ对AR大鼠的症状有明显的改善作用,可减轻大鼠AR大鼠的一般情况及鼻部局部症状,抑制炎性因子Ig E,下调促炎因子IL-4及TNF-α,减少Th2相关因子的释放,从而减轻炎症反应,这与其有效抑制TLR4/NF-κB/MyD88信号通路活化有关。