文献类型：科技成果

中文题名：基于TLR4-HSP70炎性信号通路探讨丁苯酞联合鼓室内注射TLR4抗体对梅尼埃病的干预作用及机制研究

完成人：张静婧[1];张晓明[1];王琼[1];文新[1];刘乃嘉[1];卫旭东[1];王宏伟[1];王正婷[1];王银平[1];

第一作者：张静婧

完成机构：[1]甘肃中医药大学附属医院;

第一机构：甘肃中医药大学第二附属医院

年份：2024

语种：中文

中文关键词：梅尼埃病;内耳疾病;自身免疫疾病;免疫治疗

摘要：①课题来源与背景：梅尼埃病（Meniere’s Disease, MD），是一种特发性内耳疾病。临床表现为发作性眩晕、波动性听力下降、耳鸣和/或耳胀满感。患病率为（50-200）/10万，常见于40-60岁。病理特征为内淋巴积水（en‐dolymphatic hydrops, ELH）。病因迄今不明，公认的发病机制主要有内淋巴管机械阻塞与内淋巴吸收障碍学说、免疫反应学说、内耳缺血学说等。有学者认为MD是免疫相关性内耳疾病（autoimmune inner ear disease,AIED），这其中涉及多个基因，其中热休克蛋白应激被认为是MD发病的一个重要因素。内耳并非免疫“豁免"器官，它具有免疫防御系统的解剖学组成和细胞免疫与体液免疫的特性。热休克蛋白（heat shock proteins, HSP），又称应激蛋白（stress protein, SP），广泛存在于原核、真核细胞中，参与抗原递呈加工、协同免疫及自身免疫，而HSP70家族在生物细胞中含量最高，诱导性最强，具有多种生物学功能。在正常耳蜗内HSP70呈低表达，中耳细菌感染可诱导HSP70在动物内耳中表达。主要位于螺旋神经节细胞、血管纹、螺旋缘、Corti器的支持细胞、柱状细胞、外毛细胞中。由于从细胞到人HSP具有共同的抗原表位，可出现交叉免疫反应;在应激细胞中可观察到HSP70在细胞表面的再分布，这将增加对HSP70及含有HSP70的细胞产生自身免疫反应的可能性，产生抗HSP70抗体。而血清抗HSP70自身抗体水平明显增高为自身免疫性内耳疾病的显著特征。Tollβ受体（Toll-like receptors, TLR）被认为是哺乳动物唯一将细胞外抗原信息向细胞内传递并引发炎症反应的关键跨膜蛋白。与相应配体结合后通过级联信号传导引起细胞免疫炎症反应。TLR4是人类发现的第一个Toll相关蛋白，能识别受损伤细胞或坏死细胞来源的内源性信号，Hsp70就是其中一类重要的危险信号。其信号转导可以通过核因子κB激活细胞因子基因转录，进而通过抗原递呈细胞（antigen present cell, APC）而活化T细胞。TLR4识别、介导Hsp70的信号传导，参与炎症，肿瘤，自身免疫疾病的发病机制，使转录因子NF-кB活化，启动相关靶基因转录，表达炎性细胞因子TNF-α等，介导炎性反应。丁苯酞具有良好的临床疗效和安全性，保护线粒体结构的完整、提高线粒体ATP酶活性、从而减少神经细胞的死亡，达到恢复神经功能的作用。同时保护血管结构的完整、恢复血管管径、增加动脉血流速度，从而起到重构微循环的作用。②研究目的与意义：该项目通过观察丁苯酞联合鼓室内注射TLR4抗体治疗MD的临床疗效，检测治疗前后血清HSP70、TNF-α和IL-6炎性细胞因子表达水平变化,从而阐明Tollβ受体4介导HSP70信号传导在梅尼埃病中的作用，为MD作为一种自身免疫性疾病提供临床依据，并为开展MD的免疫治疗提供理论基础。③主要论点与论据：该研究建立一种内淋巴积水小鼠模型，针对TLR4的结构和生物学特点，采用鼓室注射低、中、高三种剂量TLR4抗体，观察其在胞内区与TLR4结合后，小鼠前庭反应明显减轻，在造模成功4周后，SP/AP值>0.4,同时AP阈值升高，提示可作为早期MD内淋巴积水的一个敏感指标。耳蜗切片HE免疫组化染色中，对照组Hsp70在内耳呈低水平表达，模型组表达呈明显增强趋势，可能因为造模内淋巴积水小鼠后，使其产生针对膜迷路的体液和（或）细胞免疫反应，当该反应发展到一定强度，听功能下降，同时选择性激活细胞内的热休克基因，启动Hsp70大量合成。实验组中，施加干扰因素TLR4抗体后，内耳Hsp70蛋白表达降低，TNF-α及IL-6的浓度下降，可能是TLR4抗体与TLR4结合后，抑制了HSP70的信号传导，从而抑制此传导通路的转录因子活化，导致相关炎性因子浓度下降。丁苯酞可改善微循环障碍，对内耳的前庭康复起到协同治疗，增强疗效作用。该实验观察到随TLR4抗体及丁苯酞浓度剂量增加，血清Hsp70及炎性因子水平下降。且增加TLR4鼓室注射浓度至200μg时，干预作用最大。实验证明TLR4／Hsp70通路在MD中发挥重要作用，可能与其发病机制相关。④创见与创新：通过激活TLR4-HSP70信号通路传导，导致血清中HSP70、TNF-α和IL-6炎性细胞因子表达水平变化，从而为梅尼埃病（MD）作为一种自身免疫性疾病提供免疫治疗依据;鼓室内注射激素等药物治疗内耳系统疾病已应用广泛，但鼓室注射抗体鲜有报道，该课题建立一种内淋巴积水小鼠模型，针对TLR4的结构和生物学特点，采用鼓室注射低、中、高三种剂量，观察其在胞内区与TLR4结合后，MD内淋巴积水的监测指标变化，通过调节TLR4抗体鼓室注射用量，观察干预治疗的最佳剂量;同时加入丁苯酞，对内耳的前庭康复起到协同作用，为研发新β受体阻断剂，从病因控制梅尼埃病提供新的思考。⑤社会经济效益，存在的问题：该课题中，检测HSP70的表达，研究TLR4-HSP70信号传导通路及其如何发挥作用造成组织细胞损伤，从而进一步探讨梅尼埃病可能的免疫学发病机制，为临床开展梅尼埃病的免疫治疗提供理论依据。