文献类型：学位论文

中文题名：硫柳汞对白血病细胞株U937、CEM-C1、BALL-1凋亡、自噬及PI3K/AKt/mTOR信号通路作用的研究

作者：王莹[1];

第一作者：王莹

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：白海;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：硫柳汞;白血病;PI3K/AKt/mTOR信号通路;自噬

年份：2021

摘要：目的:探讨硫柳汞对人白血病细胞株U937、CEM-C1、BALL-1的增殖、凋亡作用及其对PI3K/AKt/mTOR通路相关蛋白表达的影响,进而研究硫柳汞对白血病的应用潜能及作用机制。 材料与方法:以人白血病细胞株U937、CEM-C1、BALL-1为研究对象,培养细胞,绘制生长曲线,取对数期的细胞以不同浓度的硫柳汞不同时间内作用于U937、CEM-C1、BALL-1细胞株,观察细胞形态,确定最适宜的硫柳汞浓度用于后续实验。最终确定0、1、2、2.5、5umol/L浓度的硫柳汞分别作用于U937、CEM-C1、BALL-1细胞24、48、72h,CCK-8法测细胞增殖抑制率,Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术测细胞凋亡率,Western blot法测硫柳汞对细胞凋亡蛋白cleaved Caspase-3、自噬蛋白LC3-II及PI3K/AKt/mTOR通路相关蛋白的影响。 结果: 1.U937、CEM-C1、BALL-1细胞株系悬浮细胞,呈不规则圆形,胞体直径约10-15um,对数生长期细胞密集,呈满天星分布,经硫柳汞处理后细胞出现棘样不规则改变,可见较多伪足,核染色较深。 2.48小时内,硫柳汞以浓度、剂量依赖性对U937、CEM-C1、BALL-1细胞系具有增殖抑制作用;72小时未见明显的时间、剂量依赖性。 3.以0、1、2、2.5、5umol/L硫柳汞培养U937、CEM-C1、BALL-1细胞48h,U937细胞凋亡率分别为:37.5333±0.28868、24.1367±0.23587、42.8233±0.37233、49.0933±0.46608、58.2333±0.5774;CEM-C1细胞凋亡率分别为:1.6567±0.07095、20.99±0.05292、33.0933±0.07234、29.8367±0.01155、36.5267±0.07234;BALL-1细胞凋亡率分别为:22.38±0.07、20.56±0.12124、18.4667±0.26006、55.3333±0.25166、54.5667±0.15275;在0、1、2、5umol/L的浓度时,随着浓度越高,凋亡率越高,差异具有统计学意义。 4.硫柳汞可以下调PI3K、AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达,呈浓度剂量依赖性。与对照组(0umol/L)相比,硫柳汞药物组(1、2、2.5、5umol/L)PI3K、AKT、mTOR、p-mTOR蛋白表达量明显下降,随药物浓度增加蛋白表达量下降;表明硫柳汞诱导U937、CEM-C1、BALL-1细胞凋亡可能正是因为抑制了PI3K/AKt/mTOR通路。 5.硫柳汞通过Caspase-3途径促进U937、CEM-C1、BALL-1细胞凋亡,呈浓度剂量依赖性。与对照组(0umol/L)相比,硫柳汞药物组(1、2、2.5、5umol/L)Caspase-3、LC3-II蛋白表达量明显上升,随浓度增加蛋白表达量上升。 结论:硫柳汞通过下调PI3K/AKt/mTOR通路激活U937、CEM-C1、BALL-1细胞自噬、诱导凋亡,同时抑制其增殖。