文献类型：学位论文

中文题名：基于P2X7R/NLRP3/Caspase-1信号通路探讨热补针法治疗类风湿关节炎的抗炎机制

作者：何文洁[1];

第一作者：何文洁

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：杜小正;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：热补针法;类风湿关节炎;P2X7R;NLRP3;Caspase-1

年份：2021

摘要：目的:观察热补针法针刺“足三里”对类风湿关节炎(rheumatoid arthritis,RA)寒证家兔模型膝关节滑膜组织P2X7R表达的影响,从调控P2X7R/NLRP3/Caspase-1炎症通路角度探讨热补针法治疗RA的抗炎机制。 方法:30只雄性新西兰大白兔,随机选取6只作为正常组,其余24只采用卵蛋白联合弗氏佐剂诱导及低温冷冻法复制RA寒证模型,经行为学、影像学评估造模成功后,再随机分为4组,即模型组、平补平泻组、热补针法组、拮抗剂组,每组6只。热补针法组及平补平泻组分别于双侧足三里穴施以相应的针刺手法,1次/日,留针30min;拮抗剂组腹腔注射A438079 2.5mg/Kg,1次/日,正常组、模型组同一时间予以相同的抓取固定,各组连续干预7天。干预结束后观察家兔一般状况、测定痛阈、膝关节周径;运用彩超观察关节腔积液、滑膜厚度及内部血流信号;处死家兔后取膝关节滑膜组织,观察各组滑膜病理形态学改变,采用RT-PCR检测滑膜组织P2X7R、NLRP3、Caspase-1m RNA的表达;采用WB检测滑膜组织IL-1β、IL-6和TNF-α的蛋白表达。 结果:1.各组家兔一般情况及行为学改变正常组家兔精神状态良好,模型组家兔精神萎靡,活动减少甚至受限,体毛杂乱脱落无光泽,背部有溃疡的家兔溃疡愈合缓慢,膝关节明显肿胀,摄食饮水减少,便溏;干预后各针刺组及拮抗剂组家兔精神状态好转,活动量增加,家兔背部溃疡结痂愈合,膝关节肿胀度减轻,大便成形,摄食饮水量增加。2.各组家兔痛阈情况模型组家兔痛阈较正常组显著降低(P<0.05);干预后各针刺组及拮抗剂组痛阈较模型组升高(P<0.05);同平补平泻组相比,热补针法组和拮抗剂组痛阈升高更为明显(P<0.05),而拮抗剂组与热补针法组痛阈值无显著性差异(P>0.05)。3.各组家兔膝关节周径的改变模型组家兔膝关节周径较正常组明显增大(P<0.05);干预后各针刺组及拮抗剂组膝关节周径变小(P<0.05),与平补平泻组相比,热补针法组和拮抗剂组关节周径更小(P<0.05),而拮抗剂组与热补针法组关节周径无显著性差异(P>0.05)。4.各组家兔膝关节彩超的表现正常组家兔滑膜厚度无异常,滑膜内无关节积液及异常血流信号;模型组彩超可见滑膜明显增厚,滑膜内可见大量线状及点状血流信号,关节积液明显且范围广泛,伴关节肿胀;各针刺组和拮抗剂组滑膜厚度、关节积液、异常血流信号均改善。5.各组家兔膝关节滑膜组织病理形态学表现正常组滑膜组织染色均匀,细胞形态结构完整,未见炎性细胞浸润;模型组滑膜被覆细胞肿大明显、结构损伤严重,滑膜基质重度增生,炎性细胞及淋巴细胞浸润明显;各针刺组及拮抗剂组滑膜被覆细胞、滑膜基质增生情况及炎性细胞浸润情况均较前改善。病理积分:模型组滑膜组织病理积分明显高于正常组(P<0.05);干预后,各组病理积分均下降(P<0.05),其中热补针法组及拮抗剂组病理积分下降较平补平泻组更明显(均P<0.05),热补针法组与拮抗剂组病理积分无明显差异(P>0.05)。6.各组家兔膝关节滑膜组织P2X7R、NLRP3、Caspase-1 m RNA表达情况模型组家兔滑膜组织P2X7R、NLRP3、Caspase-1 m RNA表达较正常组显著升高(P<0.05);干预后,热补针法组、平补平泻组及拮抗剂组P2X7R、NLRP3、Caspase-1m RNA表达均降低(P<0.05);与平补平泻组比较,热补针法组、拮抗剂组P2X7R、NLRP3、Caspase-1 m RNA表达量更低(P<0.05);与热补针法组比较,拮抗剂组P2X7R、NLRP3、Caspase-1 m RNA表达量较热补针法略低,但二者间差异无统计学意义(P>0.05)。7.各组家兔膝关节滑膜组织IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达情况模型组家兔滑膜组织IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达较正常组明显升高(P<0.05);干预后,热补针法组、平补平泻组及拮抗剂组IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达均降低(P<0.05);与平补平泻组比较,热补针法组、拮抗剂组IL-1β、IL-6和TNF-α蛋白表达量更低(P<0.05);与热补针法组比较,拮抗剂组IL-1β的蛋白表达量略高于热补针法组,而IL-6、TNF-α的蛋白表达量略低于热补针法组,但两组间差异均无统计学意义(P>0.05)。 结论:热补针法可通过调控P2X7R/NLRP3/Caspase-1信号通路抑制下游炎性因子的分泌,发挥抗炎作用。因此,调控P2X7R/NLRP3/Caspase-1信号通路是热补针法治疗RA的抗炎机制之一。