文献类型：期刊文献

中文题名：中麻黄ISSR-PCR反应体系的建立和优化

英文题名：Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Ephedra intermedia

作者：朱田田[1,2,3];晋玲[1,2];杜弢[1,3];崔治家[1,2];林丽[1];高天鹏[4];张裴斯[1]

第一作者：朱田田

机构：[1]甘肃中医学院;[2]甘肃省高校中(藏)药化学与质量研究省级重点实验室;[3]甘肃中医学院药用植物遗传育种研究所;[4]兰州城市学院城市生态与环境生物技术中心

第一机构：甘肃中医药大学

年份：2013

卷号：24

期号：43

起止页码：4033

中文期刊名：中国药房

外文期刊名：China Pharmacy

收录：CSTPCD;;CSCD:【CSCD_E2013_2014】；

基金：国家自然科学基金资助项目(No.31160118);甘肃省教育厅科研项目(No.1106B-07);甘肃中医学院中青年科研基金资助项目(No.ZQ2011-12)

语种：中文

中文关键词：中麻黄;ISSR反应体系;建立;优化

外文关键词：Ephedra intermedia; ISSR reaction system; Establishment; Optimization

摘要：目的:建立适用于中麻黄的简单重复序列区间-聚合酶链反应(ISSR-PCR)最佳反应体系。方法:以凝胶成像系统下特异谱带特征为评价指标,以Mg2+、dNTPs、Taq DNA聚合酶、引物和DNA模板为考察因素,采用L16(45)正交试验优选条件;通过单因素试验对反应体系中各种影响因素进行筛选。结果:中麻黄ISSR-PCR最佳反应体系(20μl)为30 ng DNA模板、0.25 mmol/L dNTPs、2.0 mmol/L Mg2+(10×PCR Buffer)、0.4μmol/L ISSR引物、1.5 U Taq DNA聚合酶;并筛选出了12条ISSR-PCR引物的最佳退火温度。结论:所建中麻黄ISSR-PCR反应体系经过10份中麻黄材料检验证明该体系稳定可靠,可用于中麻黄遗传分析。
OBJECTIVE： To establish optimal ISSR-PCR reaction system for Ephedra intermedia. METHODS： The reaction system was optimized by L18（4^5） orthogonal test with specific bands under gel imaging system as index using Mg2＋, dNTPs, Taq DNA polymerase and primer, DNA template as factors. The influential factors of reaction system were screened by single factor test. RESULTS： The optimal ISSR-PCR reaction system of E. intermedia（20 μl） contained 30 ng DNA template, 0.25 mmol/L dNTPs, 2.0 mmol/L Mg2＋（10×PCR Buffer）, 0.4 μmol/L ISSR primer and 1.5 U Taq DNA polymerase. The suitable annealing tem- perature of 12 primers was determined. CONCLUSIONS： It is proved that the established ISSR-PCR reaction system of E. interme- dia would be stable and credible by the materials testing result of 10 samples of E. intermedia. This would provide the basis for the genetic analysis of E. intermedia.