文献类型：科技成果

中文题名：抗生素相关性大肠湿热证动物模型的建立及郁金散的干预作用研究

完成人：王瑞琼[1];吴国泰[1];刘峰林[1];杜丽东[1];王志旺[1];刘东玲[1];袁菊丽[1];牛婷慧[1];刘五州[1];

第一作者：王瑞琼

完成机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

年份：2024

语种：中文

中文关键词：大肠湿热证;动物实验;郁金散;临床治疗

摘要：①课题来源与背景：“抗生素相关性大肠湿热证动物模型的建立及郁金散的干预作用研究”项目为2015年甘肃省省级科技计划项目，项目编号：1508RJZA012，下达经费3.0万元，研究期限2016年01月-2018年12月。②研究目的与意义：用抗生素应激结合内因湿热法建立大肠湿热证动物模型;用证候学、生理学、肠道微生物学、肠道病理学及免疫学等多学科的技术与方法确立评价指标;考察郁金散对动物模型的影响，为治疗大肠湿热证相关疾病提供依据。③主要论点与论据：大肠湿热证的临床表征为湿热蕴结大肠，下焦气机壅滞，进而引发以腹痛、排便次数增多、溏而不爽、粪便性状异常、有粘液等，是常见的肠道功能紊乱性疾病，由于存在一定程度的肠道炎症，通常采用抗生素进行治疗，长期大量使用抗生素后会进一步引发机体发热神倦、食欲不振甚至腹痛、下痢、腹泻等现象。“内外合邪”是中医病因的重要内容之一，是指机体在内有蕴湿的条件下，外界湿热之邪易于侵犯而致病，《薛生白湿热病篇》中就有“太阴内伤，湿饮停聚，客邪再至，内外相引，故病湿热”的论述。该研究运用肥甘及辛辣饮食损伤大鼠肠道引起“内湿、内热”，利用人工气候箱模拟“外湿、外热”环境，以生物因素和抗生素应激诱导建立抗生素相关性大肠湿热证（Antibiotic associated large intestine damp heat syndrome，A-DHS）大鼠模型并进行综合评价，为后续相关研究提供参考。大量研究表明，肠功能紊乱主要由肠粘膜屏障受损引起。郁金散出自明代《元亨疗马集》，现已收录于《中国兽药典》（2010年）二部，是兽医临床治疗大肠湿热证的经典方剂，但对其现代药理学作用机制尚无深入研究。该实验以生物因素和抗生素应激诱导建立抗生素相关性大肠湿热证大鼠模型，观察郁金散对A-DHS大鼠肠粘膜屏障损伤的修复作用，并探讨其作用机制，为郁金散的现代应用研究提供实验依据。研究表明，辅助性T细胞17 (T helper 17 cells，Th17)和调节性T细胞（regulatory T cell，Treg）是CD4+T细胞的两个亚型，前者介导炎症和自身免疫性疾病，后者介导免疫耐受和免疫自稳，两者功能相反且处于相对动态平衡的状态。Th17/Treg转化平衡是维持肠道免疫稳态的重要因素，两者转化失衡引起肠黏膜损伤是诱发肠道功能紊乱性疾病的原因之一。因此，深化对Th17/Treg转化调控关系的研究对于A-DHS的治疗具有重要意义。郁金散是中兽医临床治疗大肠湿热证的经典方剂，具有清热解毒、固肠止泻、化淤止痛等功效。该次研究采用复合因素诱导建立A-DHS大鼠模型，通过观测大鼠体温、肠道敏感性和粪便性状变化，测定血清中Th17及Treg相关细胞因子及结肠组织中RORt、Foxp3蛋白表达水平等指标，探讨郁金散对A-DHS模型大鼠Th17/Treg表达的影响，为郁金散的现代应用研究提供实验依据。④创见与创新：该研究在中医理论指导下，应用抗生素应激结合内因湿热法建立了大肠湿热证动物模型;并综合应用证候学、生理学、肠道微生物学、肠道病理学及免疫学等多学科的技术与方法确立了相应的评价指标;以柳氮磺吡啶为对照，从郁金散对抗生素相关性大肠湿热证大鼠肠粘膜屏障损伤的修复作用及郁金散对抗生素相关性大肠湿热证模型大鼠Th17/Treg免疫失衡的影响等方面考察了郁金散对大肠湿热证的治疗作用、并初步明确其作用机制。解决的关键技术：1、复合因素诱导的建立了大肠湿热证动物模型，并进行了指标评价。2、郁金散通过降低体温、缓解内脏疼痛、止泻等对抗生素相关性大肠湿热证大鼠肠粘膜屏障损伤具有一定的的修复作用。其作用机制与抑制血清TNF-α、IL-1、DAO、D-乳酸及结肠组织MPO含量的增加和肠粘膜SIgA含量的减少，调节肠道菌群向正常水平恢复有关。3、Th17/Treg免疫失衡与A-DHS的发病过程密切相关，郁金散对A-DHS有一定的治疗作用，纠正Th17/Treg免疫失衡，缓解免疫反应对肠道组织的损伤是其作用机制之一。该项目的整体研究水平较高，基本建立了1套试验技术（内外合邪诱导抗生素相关性大肠湿热证大鼠模型的建立与评价），发表论文3篇，协助培养研究生2名。⑤社会经济效益，存在的问题：该项目属于基础研究，其中项目的方法设计至关重要，且研究过程的阶段小结非常关键，在实验研究中要及时发现问题、及时解决问题。该项目的研究团队中教师学生结合，有相关学科交叉结合，成员的分工、专业特长、学科特长搭配。由于时间和经费有限，该研究从其他通路就郁金散对抗生素相关性大肠湿热证的干预作用尚未进行深入研究。