文献类型：科技成果

中文题名：基于“三阴并调”探讨黑逍遥散通过调控PP2A/GSK-3β信号通路防治AD的tau蛋白磷酸化机制

完成人：王虎平[1];安耀荣[1];张艳[1];李海龙[1];李佳蔚[1];朱丽娟[1];王琳欣[1];米彩云[1];

第一作者：王虎平

完成机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

年份：2024

语种：中文

中文关键词：阿尔茨海默病;黑逍遥散;神经退行性疾病

摘要：①课题来源与背景：课题来源：2020年度第十批省级科技计划（创新基地和人才计划）项目（20JR10RA319），项目起止年月：2021年2月至2023年1月。立题背景：阿尔茨海默病(Alzheimer's disease，AD)是一种不可逆转的神经退行性疾病，随着人口老龄化加剧，阿尔茨海默病已成为一个全球性的医疗问题，尚无有效治疗方案，因此深入探究AD的发病机制、探寻有效的治则治法具有重大的临床和社会意义。近年研究表明高磷酸化的tau蛋白与AD患者的认知功能减退有高度的相关性。据此，该课题组基于中医基本理论及前期研究基础提出了肝脾肾“三阴并调”防治AD tau蛋白过磷酸化的假说。黑逍遥散作为疏肝理气，健脾运湿，补肾填精，气血并调，精血并补，补泻兼施的经典名方，是典型的肝脾肾“三阴并调”之方，而PP2A/GSK-3β信号通路是介导tau蛋白过磷酸化的敏感通路。因此，该研究基于肝脾肾“三阴并调”探讨黑逍遥散通过调控PP2A/GSK-3β信号通路防治AD的tau蛋白磷酸化机制。以黑逍遥散干预冈田酸所致AD大鼠模型，Morris水迷宫测试大鼠学习记忆能力，Western blot检测海马PP2A、GSK-3β、Tau蛋白、P-tau蛋白表达水平，RT-PCR法检测海马区相关mRNA的转录水平，高尔基染色、尼氏染色观察海马CA1、CA3区神经元变化，以阐明黑逍遥散通过调控PP2A/GSK-3β信号通路对AD tau蛋白磷酸化的干预作用及其机制。②研究目的与意义：证实黑逍遥散通过协调肝脾肾三脏对AD模型大鼠脑内tau蛋白的过度磷酸化有良好的抑制作用，其抑制大鼠脑内tau蛋白的过度磷酸化进而保护海马组织结构、增强小鼠学习记忆能力的作用，是干预AD的重要疗效机制;揭示黑逍遥散抑制大鼠脑内tau蛋白的过度磷酸化、保护神经细胞的机制是通过调节PP2A/GSK-3β信号通路实现的。③主要论点与论据：与空白组比较，假手术组、模型组大鼠第5天逃避潜伏期均延长（P<0.01），假手术组游泳总路程无明显变化（P>0.05），模型组游泳总路程增多（P<0.01）;与假手术组比较，模型组大鼠第5天逃避潜伏期延长（P<0.01），游泳总路程增多（P<0.01）;与模型组比较，盐酸多奈哌齐组、黑逍遥散高、中剂量组第5天逃避潜伏期缩短（P<0.01），游泳总路程减少（P<0.01），黑逍遥散低剂量组无明显变化（P>0.05）。与空白组比较，假手术组目标象限滞留时间百分比无明显变化（P>0.05），模型组大鼠在目标象限滞留百分比降低（P<0.01），其它象限无明显变化（P>0.05）;与假手术组比较，模型组大鼠在目标象限停留百分比降低（P<0.01），其余象限无明显变化（P>0.05）;与模型组比较，黑逍遥散高、中剂量组、盐酸多奈哌齐组大鼠目标象限停留百分比显著提高（P<0.01），黑逍遥散低剂量组未见显著差异（P>0.05），其余象限无明显变化（P>0.05）。与空白组比较，假手术组大鼠血清中tau、PP2A、GSK3β含量未见明显变化（P>0.05），模型组大鼠血清中tau、GSK3β含量增多（P<0.01），PP2A含量减少（P<0.01）;与假手术组比较，模型组大鼠血清中tau、GSK3β表达增多（P<0.01），PP2A含量减少（P<0.01）;与模型组比较，各剂量组大鼠血清中tau、GSK3β含量减少（P<0.01），PP2A含量增多（P<0.05，P<0.01）。与空白组比较，假手术组大鼠海马中tau含量增多（P<0.01），PP2A、GSK3β未见明显变化（P>0.05），模型组大鼠海马中tau、GSK3β含量增多（P<0.01），PP2A含量减少（P<0.01）;与假手术组比较，模型组大鼠海马中tau、GSK3β含量增多（P<0.01），PP2A含量减少（P<0.01）;与模型组比较，各剂量组大鼠组织中tau含量减少（P<0.01），盐酸多奈哌齐组、黑逍遥散高、中剂量组GSK3β含量减少（P<0.05，P<0.01），黑逍遥散低剂量组无明显变化（P>0.05），盐酸多奈哌齐组、黑逍遥散高、中剂量组PP2A含量增加（P<0.01），黑逍遥散低剂量组无明显变化（P>0.05）。与空白对照组比较，模型组大鼠海马组织tau mRNA表达水平升高(P<0.01)，Ppp2ca、Ppp2cb mRNA表达水平下降(P<0.05，P<0.01);与模型对照组比较，各给药组tau mRNA表达水平均显著下降(P<0.01)，多奈哌齐0.005 g/kg及黑逍遥散17 g/kg、黑逍遥散8.5 g/kg Ppp2ca、Ppp2cb mRNA表达水平升高(P<0.05，P<0.01)。与空白组比较，假手术组大鼠海马CA1区神经元树棘突密度减少（P<0.01），树突分支数量无明显变化（P>0.05），模型组大鼠海马CA1区神经元树棘突密度和树突分支数量减少（P<0.01）;与假手术组比较，模型组大鼠海马CA1区神经元树棘突密度和树突分支数量减少（P<0.01）;与模型组比较，盐酸多奈哌齐组和黑逍遥散各剂量组海马CA1区神经元神经元树棘突密度和树突分支数量均增加（P<0.05，P<0.01）。④创见与创新：从“三阴并调”角度探讨黑逍遥散防治AD的tau蛋白磷酸化机制，具有思路和方法创新性。⑤社会经济效益，存在的问题：社会经济效益：探讨黑逍遥散通过调控PP2A/GSK-3β信号通路抑制大鼠脑内tau蛋白的过度磷酸化的作用及其机制，以期为临床应用黑逍遥散防治AD提供实验支撑。成果已公开发表标注该项目基金名称及编号的论文2篇，即将发表2篇，培养硕士研究生1名。存在的问题：经费有限，没能深入拓展研究，将在后续研究中继续深入探究。