文献类型：学位论文

中文题名：艾灸“足三里”对骨髓抑制小鼠骨髓细胞Wnt5a、β-catenin影响的实验研究

作者：李晓霞[1];

第一作者：李晓霞

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：王亚军;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：艾灸;骨髓抑制;肿瘤化疗;Wnt信号通路;β-catenin蛋白;生物学机制

年份：2021

摘要：目的：本课题在艾灸临床治疗化疗所致骨髓抑制疗效确切的基础上，以骨髓抑制荷瘤小鼠为研究对象，从与肿瘤发病紧密相关的Wnt信号通路入手，研究艾灸对肿瘤化疗后骨髓抑制小鼠骨髓细胞Wnt信号通路关键蛋白Wnt5a、β-catenin表达的影响，探究艾灸对荷瘤小鼠化疗后血细胞的变化，为艾灸干预骨髓抑制提供相关生物学机制依据，为化疗后骨髓抑制患者转换治疗策略提供依据。　　方法：KM小鼠，50只，SPF级，雄性，体重15-20g。设10只为空白组，其余小鼠全部接种瘤株，荷瘤造模成功后分为荷瘤模型组、环磷酰胺（CTX）组、鲨肝醇组、艾灸治疗组。除荷瘤模型组外，各组全部以CTX（100mg/kg/d）用药量进行腹腔注射，建立荷瘤鼠骨髓抑制模型。造模成功后，鲨肝醇组给予腹腔注射鲨肝醇治疗，艾灸组给予艾灸足三里治疗，每次每穴3min，一日一次，共治疗10天。治疗结束2h后小鼠眼球取血，血标本用自动血检测仪检测白细胞、血小板数量;剥取肿瘤组织，称取瘤重，计算抑瘤率;剥取胸腺、脾脏，计算小鼠脏器指数;取小鼠一侧股骨，运用HE染色、免疫组化染色等技术，观察艾灸对荷瘤鼠化疗后骨髓组织的影响，以Wnt5a、β-catenin蛋白为检测指标，探究艾灸对Wnt信号通路的影响。　　结果：　　1各组小鼠一般情况观察　　空白组小鼠在整个实验中没有进行造模干预，所有情况，包括进食、饮水等都呈现健康状态，行动灵活，反应迅速，未出现任何异常情况，体形较其他组稍大。　　荷瘤模型组小鼠进行了荷瘤造模，在实验中除了因腋下肿瘤增长造成了一定的行动不便之外，未出现掉毛现象，精神状态尚可，饮水进食正常，在干预治疗第8天有1只鼠死亡。　　CTX组小鼠进食饮水减少，体重减轻，精神不振，喜倦卧成堆，皮毛无光泽，造模结束3天后开始出现毛发脱落现象，活动迟缓，拱背，眼睑苍白，偶见便血，治疗第6天、第9天分别有1只鼠死亡。　　鲨肝醇组：相较于CTX组，鲨肝醇组小鼠精神有所好转，进食及饮水情况好转，个别小鼠眼睑发炎症状，略有烦躁，治疗7天、第9天分别有1只鼠死亡。　　艾灸组：相较于CTX组，艾灸组小鼠上述情况有一定程度恢复，精神好转，少数仍有烦躁、倦卧成堆、拱背情况，进食及饮水逐渐正常，行动灵活。　　2小鼠外周血细胞数目变化　　荷瘤模型组小鼠与空白组相比，外周血白细胞差异无统计学意义（P＞0.05），淋巴细胞显著下降（P＜0.01），差异具有统计学意义，血小板较空白组显著增加（P＜0.01），差异具有统计学意义;CTX组小鼠与空白组相比，白细胞、淋巴细胞显著下降（P＜0.01），差异具有统计学意义，血小板差异无统计学意义（P＞0.05）;鲨肝醇组小鼠与空白组相比，外周血白细胞、血小板差异无统计学意义（P＞0.05），淋巴细胞下降（P＜0.01），差异具有统计学意义;艾灸组小鼠与空白组相比，外周血白细胞、淋巴细胞差异无统计学意义（P＞0.05），血小板升高（P＜0.05），差异具有统计学意义;鲨肝醇组小鼠与CTX组相比，白细胞、血小板、淋巴细胞差异无统计学意义（P＞0.05）;艾灸组小鼠与CTX组相比，血小板、淋巴细胞差异无统计学意义（P＞0.05），白细胞升高（P＜0.05），差异具有统计学意义。　　3小鼠脏器指数比较　　（1）瘤重：CTX组、鲨肝醇组瘤重比荷瘤模型明显降低（P＜0.05），差异具有统计学意义，鲨肝醇组瘤重与CTX组相比明显降低（P＜0.05），差异具有统计学意义，艾灸组瘤重比荷瘤模型明显降低（P＜0.01），差异具有统计学意义，艾灸组抑瘤率明显优于鲨肝醇组。　　（2）脏器指数：荷瘤模型组小鼠脾脏重量、脾脏指数、胸腺重量与空白组相比均增高（P＜0.01），差异具有统计学意义，荷瘤模型组小鼠胸腺指数与空白组相比显著增高（P＜0.05），差异具有统计学意义;CTX组小鼠脾脏重量、脾脏指数、胸腺重量与空白组相比显著增高（P＜0.01），差异具有统计学意义;鲨肝醇组小鼠脾脏重量、脾脏指数、胸腺重量与空白组相比显著增高（P＜0.01），差异具有统计学意义;艾灸组小鼠脾脏重量、脾脏指数与空白组相比显著增高（P＜0.01），差异具有统计学意义;鲨肝醇组小鼠脏器指数与CTX组相比差异无统计学意义（P＞0.05）;艾灸组小鼠脾脏重量、脾脏指数与CTX组相比明显降低，差异具有统计学意义（P＜0.05）。　　4小鼠骨髓形态学改变　　（1）空白组小鼠骨髓造血组织粒系细胞大量存在，结构完整，巨核细胞清晰，排列均匀紧密;（2）与空白组相比，荷瘤模型组小鼠骨髓造血组织中存在大量炎性细胞，造血面积缩小;（3）与荷瘤模型组相比，CTX组小鼠骨髓细胞炎性细胞有所减少，但与空白组相比，CTX组小鼠骨髓造血面积明显缩小，小鼠骨髓组织骨髓细胞形态异常，血窦出现破损现象;（4）与CTX组相比，鲨肝醇组小鼠和艾灸组小鼠骨髓细胞形态大致正常，造血面积明显增加，炎性细胞明显减少。　　5小鼠骨髓细胞Wnt5a、β‐catenin表达　　（1）Wnt5a：荷瘤模型组小鼠骨髓细胞Wnt5a蛋白表达与空白组相比明显升高（P＜0.01），差异具有统计学意义;CTX组小鼠骨髓细胞Wnt5a蛋白表达与空白组相比明显升高（P＜0.01），差异具有统计学意义;鲨肝醇组小鼠骨髓细胞Wnt5a蛋白表达与空白组相比明显降低（P＜0.01），差异具有统计学意义;艾灸组小鼠骨髓细胞Wnt5a蛋白表达与空白组相比明显降低（P＜0.01），差异具有统计学意义。　　鲨肝醇组小鼠骨髓细胞Wnt5a蛋白表达比CTX组明显降低（P＜0.01），差异具有统计学意义，艾灸组小鼠骨髓细胞Wnt5a蛋白表达与CTX组相比明显降低（P＜0.01），差异具有统计学意义。　　（2）β‐catenin：模型组小鼠骨髓细胞β‐catenin蛋白表达与空白组相比明显升高（P＜0.01），差异具有统计学意义;CTX组小鼠骨髓细胞β‐catenin蛋白表达与空白组相比明显升高（P＜0.01），差异具有统计学意义;鲨肝醇组小鼠骨髓细胞β‐catenin蛋白表达与空白组相比明显降低（P＜0.01），差异具有统计学意义;艾灸组小鼠骨髓细胞β‐catenin蛋白表达与空白组相比明显降低（P＜0.01），差异具有统计学意义。　　鲨肝醇组小鼠骨髓细胞β‐catenin蛋白表达与CTX组相比差异无统计学意义（P＞0.05）;艾灸组小鼠骨髓细胞β‐catenin蛋白表达与CTX组相比明显降低（P＜0.01），差异具有统计学意义。　　结论：　　1艾灸足三里能显著提高CTX化疗后小鼠白细胞水平，改善骨髓抑制小鼠精神、饮食状态，提高小鼠的生存生活质量;艾灸足三里对恢复小鼠脾脏指数、抑瘤效果优于鲨肝醇。　　2艾灸足三里能显著改善CTX化疗后骨髓受损状态，能使骨髓造血面积明显增加，炎性细胞明显减少。　　3CTX化疗损伤了小鼠的骨髓造血微环境，促使骨髓细胞Wnt5a、β‐catenin蛋白表达水平升高可能是导致骨髓抑制的机理之一;艾灸足三里对骨髓抑制小鼠骨髓造血微环境和骨髓损伤的修复机制可能与调节Wnt信号通路关键细胞因子Wnt5a和β-catenin蛋白表达有关。