文献类型：学位论文

中文题名：当归红芪超滤物对miRNA-21-5P靶向调控TGF-β1/Smad3信号通路介导放射性心肌纤维化的干预效应

作者：贾成文[1];

第一作者：贾成文

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：赵信科;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：当归红芪超滤物;反射性心肌纤维化;放射性心脏病;miRNA-21-5P;TGF-β1/Smad3

年份：2023

摘要：目的:揭示miRNA-21-5P靶向调控TGF-β1/Smad3信号通路介导的放射性心脏病（Radiation-induced heart disease,RIHD）发生机制及当归红芪超滤物（Ultra-filtration Extraction from Angelicae Sinensis Radix and HedysariRadix,RAS-RH）的干预效应,从而明确当归红芪超滤物在防治放射性心肌纤维化的作用及机制,为临床防治放射性心脏病提供科学依据并丰富“益气养血”理论的科学内涵。方法:（1）采用6Gy辐射量X线照射心肌成纤维细胞建立辐射损伤模型,通过Western Blot检测α-SMA的表达,结合细胞形态学的改变评价辐射损伤模型是否成功。（2）将心肌成纤维细胞及辐射损伤模型随机分为正常组（正常培养）、辐照组（6Gy X线照射+生理盐水0.5 m L）、miRNA-21-5P+辐照组(6Gy X线照射+miRNA-21-5P转染)、miRNA-21-5P+辐照组(6 Gy X线照射+miRNA-21-5P转染),EDU染色、免疫荧光染色检测细胞增殖能力,RT-PCR测定细胞中miRNA-21-5P基因表达,Western Blot检测细胞中TGF-β1、Smad3、Smad7、MMP-9、TIMP1、α-SMA蛋白表达。（3）采用大鼠灌胃方法制备当归红芪超滤物含药血清,将心肌成纤维细胞及辐射损伤模型随机分为正常组（正常培养）、辐照组（6 Gy X线照射+生理盐水0.5 m L）、RAS-RH+辐照组（6 Gy X线照射+RAS-RH含药血清0.5 m L）,EDU染色、免疫荧光染色检测细胞增殖能力,Western Blot测定细胞中TGF-β1、Smad3、Smad7、MMP-9、TIMP1、α-SMA蛋白表达。结果:（1）与正常组相比辐照组miRNA-21-5P的表达明显上调（P<0.05）,同时α-SMA、TGF-β1蛋白的表达显著上调（P<0.01）。（2）与正常组相比,辐照组TGF-β1、Smad3的表达上调,而且Smad7表达下调,与miRNA-21-5P+辐照组相比,miRNA-21-5P+辐照组miRNA-21-5P、TGF-β1、Smad3的表达显著下调,同时Smad7的表达显著上调（P<0.01）。与正常组相比,辐照组MMP-9的表达下调,TIMP1表达上调,与miRNA-21-5P+辐照组相比,miRNA-21-5P+辐照组MMP-9、TIMP1的表达无统计学差异（P>0.05）,而miRNA-21-5P+辐照组TIMP1的表达下调,同时MMP-9的表达上调（P<0.05）。与正常组相比,辐照组EDU阳性率增加,与miRNA-21-5P+辐照组相比,miRNA-21-5P+辐照组EDU阳性率有所降低（P<0.05）,但细胞数量无明显减少。（3）与辐照组相比,RAS-RH+辐照组miRNA-21-5P、α-SMA的表达显著下调（P<0.01）。与辐照组相比,RAS-RH+辐照组TGF-β1的表达下调（P<0.05）、Smad3的表达显著下调（P<0.01）,同时Smad7的表达上调（P<0.05）。与辐照组相比,而RAS-RH+辐照组TIMP1的表达下调（P<0.05）,同时MMP-9的表达上调（P<0.05）。与辐照组相比,RAS-RH+辐照组EDU阳性率略微降低,结果无统计学意义,活细胞数目无明显差异。结论:通过miRNA-21-5P靶向调控TGF-β1/Smad3信号通路是介导放射性心肌纤维化发生的关键机制,同时当归红芪超滤物可通过“扶正祛邪”功效有效干预该机制从而防治放射性心肌纤维化。