文献类型：学位论文

中文题名：高糖/ox-LDL对肝窦内皮细胞Sortilin表达的调节

作者：蔺文燕[1];

第一作者：蔺文燕

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：刘静;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：2型糖尿病;非酒精性脂肪肝;肝窦内皮细胞;氧化性低密度脂蛋白;Sortilin

年份：2019

摘要：目的：2型糖尿病(T2DM)和非酒精性脂肪肝(NAFLD)与氧化性低密度脂蛋白(ox-LDL)和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的升高密切相关。Sortilin通过溶酶体降解等途径参与肝脏脂质代谢。最近的研究表明，高糖/ox-LDL对肝窦内皮细胞(liver sinusoidal endothelial cells，LSECs)sortilin表达的调节及炎症因子的释放至关重要。本研究我们初步探讨了高糖/ox-LDL对LSECsSortilin表达调节及参与调节的因子相互作用。　　方法：提取和分离鼠原代LSECs，建立LSECs的培养体系。Anti-CD31鉴定LSECs。设立对照组(Control，CGS 5.5mmol/L)、高糖组(HG，CGS 25mmol/L)、ox-LDL组(Cox-LDL100μg/ml)和高糖+ox-LDL组(HG+ox-LDL，CGS25mmol/L+Cox-LDL100μg/ml)，LV-Sort1组(CGS25mmol/L+Cox-LDL100μg/ml+LV-Sort11×108TU/ml)。油红O(ORO)染色观察各组细胞的脂质沉积情况;AnnexinV-FITC/PI双染检测各组细胞的凋亡情况;细胞免疫荧光技术检测各组细胞Sortilin的定位表达;各组细胞培养24h后提取mRNA和蛋白质，采用实时荧光定量PCR(RT-PCR)和Westernblotting技术分别从基因和蛋白水平检测各组细胞Sortilin、IL-6和TNF-α的表达水平。采用SPSS21.0软件进行统计分析。　　结果：通过Anti-CD31免疫荧光我们证实sortilin表达于LSECs;通过ORO染色表明高糖和ox-LDL增加了LSECs脂质的沉积(P＜0.05);通过流式细胞仪(FCM)我们发现高糖和ox-LDL增加了LSECs的凋亡(P＜0.05);细胞免疫荧光、Westernblotting和RT-PCR表明，高糖和ox-LDL下调sortilin的表达;慢病毒载体感染SORT1且感染后上调了sortilin的表达(P＜0.05);感染后减少了细胞的凋亡及IL-6和TNF-α炎症因子的释放(P<0.05)。　　结论：Sortilin表达于LSECs;高糖和ox-LDL协同增加脂质沉积，细胞的凋亡，下调LSECssortilin的表达以及增加炎症因子的表达;慢病毒载体感染SORT1后上调了sortilin表达，减少了细胞的凋亡及炎症因子的表达。这些发现对治疗T2DM和NAFLD提供了新的分子机制及理论基础。