文献类型：学位论文

中文题名：基于脑-肠轴探讨培土生金法对肺脾两虚型COPD大鼠Ghrelin-Obestatin信号调节通路的影响

作者：桑凯[1];

第一作者：桑凯

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：孙杰;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：慢性阻塞性肺疾病;培土生金法;信号通路;脑-肠轴组织

年份：2018

摘要：目的：　　建立慢性阻塞性肺疾病（COPD）肺脾两虚型大鼠模型，研究培土生金法干预下Ghrelin-Obestatin系统相关基因、蛋白在模型大鼠脑-肠轴组织中的表达水平，以期从脑-肠互动视角探讨培土生金法防治COPD合并营养不良的作用机制。　　方法：　　75只SPF级Wistar大鼠随机分为空白对照组、肺脾两虚观察组、药物干预组（根据药物干预时间不同，分为28d、35d、42d组），每组15只。肺脾两虚观察组及药物干预组采用复合造模法（烟熏+气管内滴注脂多糖+灌服冰冷番泻叶浸液）建立肺脾两虚型COPD大鼠，药物干预组在造模同时给予参苓白术散灌胃，分别于药物干预第28天、35天、42天对各组大鼠进行肺功能检测，处死大鼠，取大鼠下丘脑及十二指肠组织，利用RT-PCR法、免疫组化法及免疫印迹法测定大鼠下丘脑组织及十二指肠组织中Ghrelin、Obestatin及其受体（GHSR、GPR39）的mRNA及蛋白含量表达变化。　　结果：　　1.大鼠肺功能的变化（清醒状态下）：与空白对照组相比，肺脾两虚观察组大鼠肺功能TV、EV、F、RT、PIF、PEF明显增高（P＜0.05），差异具有统计学意义，EF50、AV明显下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）;与肺脾两虚观察组相比，参苓白术散28d组RT增高（P＜0.05），TV、EV、F、PIF、PEF显著降低（P＜0.05）;参苓白术散35d组AV、RT升高（P＜0.05），EF50、TV、EV、F、PIF、PEF降低（P＜0.05）;参苓白术散42d组AV升高（P＜0.05），EF50、F、RT、PIF、PEF降低（P＜0.05），差异具有统计学意义。　　2.HE染色观察大鼠肺组织、下丘脑、十二指肠组织病理变化：2.1大鼠肺组织病理变化：空白对照组镜下观察可见支气管黏膜上皮纤毛排列整齐，未见腺体增生，肺泡大小、结构正常，无炎性细胞浸润;肺脾两虚观察组可见支气管黏膜上皮脱落，纤毛倒伏、断裂，大量炎性细胞浸润，平滑肌肥厚增生，肺泡壁断裂、变薄、结构破坏，多个肺泡腔融合，形成肺大疱;参苓白术散28d组支气管黏膜上皮断裂、脱落，仍有炎性细胞浸润;参苓白术散35d组可见支气管黏膜上皮脱落，炎性细胞浸润，部分肺泡腔融合，程度较模型组轻;参苓白术散42d组可见支气管黏膜上皮部分脱落，少量炎性细胞浸润，肺大疱程度较肺脾两虚观察组轻。2.2大鼠下丘脑病理变化：各组大鼠下丘脑病理变化不明显，均可见结构完整、排列整齐的神经细胞。2.3大鼠十二指肠病理变化：空白对照组大鼠十二指肠黏膜上皮形态正常，结构完整，绒毛清楚，未见缺损，未见炎性细胞浸润;肺脾两虚观察组可见十二指肠黏膜结构破损，上皮细胞变性坏死脱落，间质炎症细胞增多，轻度水肿，黏膜下层及肌层结构完整;参苓白术散28d组可见十二指肠绒毛弯曲，绒毛表面上皮缺失，间质炎症细胞浸润，程度较轻于肺脾两虚观察组;参苓白术散35d组可见十二指肠黏膜部分结构破损，间质炎性细胞浸润;参苓白术散42d组可见绒毛偶有断裂，上皮细胞脱落程度轻于肺脾两虚观察组，少量炎性细胞浸润。　　3.各组大鼠下丘脑、十二指肠组织Ghrelin、Obestatin、GHSR、GPR39mRNA表达：3.1大鼠下丘脑Ghrelin、Obestatin、GHSR、GPR39mRNA的表达：与空白对照组相比，肺脾两虚观察组大鼠下丘脑Ghrelin、GHSR、GPR39mRNA表达水平降低，其差异具有统计学意义（P＜0.05）;与肺脾两虚观察组相比，各药物干预组下丘脑组织中Ghrelin、GHSR、GPR39mRNA表达水平升高（P＜0.05），其组间比较具有差异性（P＜0.05）。3.2大鼠十二指肠组织Ghrelin、GHSR、GPR39mRNA的表达：与空白对照组相比，肺脾两虚观察组大鼠十二指肠组织Ghrelin、GHSR、GPR39mRNA表达减少（P＜0.05）;与肺脾两虚观察组相比，各药物干预组Ghrelin、GHSR、GPR39mRNA表达水平升高（P＜0.05），并且随着干预时间的增加，其含量增加明显，组间比较有差异性（P＜0.05）。　　4.各组大鼠下丘脑、十二指肠组织Ghrelin、Obestatin、GHSR、GPR39平均光密度的表达：4.1大鼠下丘脑Ghrelin、Obestatin、GHSR、GPR39平均光密度的表达：与空白对照组相比，肺脾两虚观察组大鼠下丘脑组织中Ghrelin、GHSR、Obestatin、GPR39平均光密度明显降低（P＜0.05），差异具有统计学意义;与肺脾两虚观察组相比，下丘脑组织中Ghrelin、GHSR、Obestatin、GPR39平均光密度升高（P＜0.05），差异具有统计学意义，各指标组间差异明显（P＜0.05）。4.2大鼠十二指肠组织Ghrelin、Obestatin、GHSR、GPR39平均光密度的表达：与空白对照组相比，肺脾两虚观察组大鼠十二指肠组织中Ghrelin、GHSR、Obestatin、GPR39平均光密度明显降低（P＜0.05）;与肺脾两虚观察组相比，参苓白术散28d组大鼠十二指肠中Ghrelin、GHSR、GPR39无统计学意义（P＞0.05）;参苓白术散35d组Ghrelin、GHSR无统计学意义（P＞0.05），参苓白术散42d组Ghrelin、GHSR、Obestatin、GPR39平均光密度升高（P＜0.05），差异具有统计学意义。　　结论：　　1.在肺脾两虚型COPD大鼠模型的发病过程中，由于胃肠黏膜的损伤，导致Ghrelin-Obestatin信号调节通路与脑-肠互动异常，影响机体能量代谢和营养状态而参与COPD的发病，这或许是COPD合并营养不良的发病机制之一。　　2.培土生金法可改善大鼠一般状况及肺功能，调节下丘脑及十二指肠组织中Ghrelin、Obestatin及其受体的表达水平，对Ghrelin-Obestatin信号调节通路有影响。　　3.培土生金法可能是通过调节Ghrelin-Obestatin信号通路及影响脑-肠互动达到防治COPD合并营养不良的目的，从分子层面为培土生金法防治COPD提供理论与实验依据。