文献类型：学位论文

中文题名：基于JAK1/STAT6信号通路探讨湿疹膏对特应性皮炎作用机制的实验研究

作者：王宁[1];

第一作者：王宁

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：王思农;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：特应性皮炎;湿疹膏;病因病机;JAK1-STAT6信号通路;炎症反应

年份：2024

摘要：目的:探究湿疹膏通过JAK1/STAT6信号通路干预特应性皮炎（atopic dermatitis,AD）炎症反应的作用机制,为湿疹膏临床应用提供科学的理论依据。方法:准备Wistar大鼠62只,造模前一天对所有大鼠背部皮肤进行剃毛处理,范围约2cm×4cm,按随机数字表法空白组分10只,余52只造模,先将大鼠背部皮肤脱毛,初期连续3天用1%的DNCB 200μL溶液（基质液丙酮:橄榄油=4:1）涂抹AD造模组大鼠背部皮肤组织进行致敏,每天1次,致敏后可见大鼠频繁抓挠、打滚,持续2小时,于实验第14、17、19、22、24、27和29天分用0.5%DNCB 200μL溶液涂抹于大鼠背部皮肤进行激发,每天1次,每次激发均可见大鼠瘙痒剧烈,频繁出现搔抓、打滚行为,背部皮肤逐渐出现红斑、丘疹、水肿、抓痕、脱屑。造模结束后,随机选取2只大鼠取皮肤组织进行HE染色观察病理,若表皮出现过度角化或角化不全、棘层增厚、棘细胞间水肿、皮突延长、真皮全层见大量炎症细胞浸润,呈现严重的病理损伤,说明特应性皮炎大鼠模型造模成功。将造模组剩余50只大鼠按随机数字表法分为模型组（M组）,阳性对照组（Y组）,湿疹膏高剂量组（SZ-G组）、中剂量组（SZ-Z组）、低剂量组（SZ-D组）,每组10只。湿疹膏高（0.5g/cm2）、中（0.25g/cm2）、低（0.125g/cm2）剂量,阳性对照组给予丁酸氢化可的松乳膏（0.25g/cm2）,每日1次,连续给药14天,模型组、空白组不予处理。末次用药24h后,观察各组大鼠皮肤组织外观及搔抓次数。采用HE染色镜下观察组织病理学变化,ELISA检测大鼠血清IL-4、IL-5、IL-13、IL-31、TNF-α含量,逆转录聚合酶链式扩增反应（RT-PCR）检测组织中IL-4、JAK1、STAT6的mRNA的表达,蛋白免疫印迹法（WB）和免疫组织化法检测IL-4、P-JAK1、P-STAT6蛋白相对表达量。结果:1、大鼠皮炎评分及搔抓次数对比:与K组相比,M组大鼠背部皮肤干燥或脱屑、出血或红疹、溃烂或表皮脱落、水肿等症状,皮炎评分高,搔抓次数多,差异有统计学意义（P<0.01）;与M组相比,Y、SZ-G、SZ-Z、SZ-D组大鼠皮炎评分逐渐下降,搔抓次数逐渐减少,差异有统计学意义（P<0.01）,且以Y组、SZ-G组最为明显。2、肉眼观察各组大鼠的皮损变化情况:与K组相比,M组皮表颜色较红,皮肤表面破损明显,局部皮肤干燥,皮屑脱落较严重,较多散在性皮疹分布;与M组对比,各治疗组大鼠皮肤组织质地柔软,皮色恢复成淡粉色,干燥脱屑现象减轻,且Y、SZ-G组皮肤基本正常,与K组无明显不同。3、组织病理学观察:与K组相比,M组大鼠皮肤组织结构严重破坏,表皮出现明显角化过度及角化不全、棘层增厚、皮突延长、毛细血管扩张、棘细胞间水肿、炎性细胞浸润,呈严重的病理损伤;与M组比较,各治疗组皮肤组织基本恢复正常,表皮角化有不同程度缓解,棘层变薄,棘细胞间水肿、炎性细胞浸润与毛细血管扩张显著改善,以Y、SZ-G组最明显。4、ELISA结果显示:与K组比较,M组IL-4、IL-5、IL-13、IL-31、TNF-α的表达水平上升,差异有统计学意义（P<0.01）;与M组比较,Y、SZ-G、SZ-Z组IL-4、IL-5、IL-13、IL-31、TNF-α均下降,差异有统计学意义（P<0.01）;SZ-D组IL-5、IL-31、TNF-α表达下降,差异有统计学意义（P<0.01）,IL-4、IL-13表达下降,差异有统计学意义（P<0.05）。5、RT-PCR结果显示:与K组比较,M组IL-4、JAK1、STAT6的mRNA表达水平上升,差异有统计学意义（P<0.01）;与M组比较,Y组、SZ-G、SZ-Z组IL-4、JAK1、STAT6的mRNA表达逐渐下降,差异有统计学意义（P<0.01）,SZ-D组IL-4、JAK1、STAT6的mRNA表达降低,差异有统计学意义（P<0.05）。6、WB结果显示:与K组比较,M组大鼠皮肤组织中IL-4、P-JAK1、P-STAT6表达均增高,差异有统计学意义（P<0.01）;与M组比较,Y、SZ-G、SZ-Z组组织IL-4、P-JAK1、P-STAT6的蛋白表达均有降低,差异有统计学意义（P<0.01）;SZ-D组大鼠P-JAK1、P-STAT6的蛋白表达降低,差异有统计学意义（P<0.05）;与M组相比,SZ-D组组织IL-4虽有下降趋势,但差异无统计学意义（P>0.05）。7、免疫组化结果显示:与K组比较,M组大鼠组织中IL-4表达升高,差异有统计学意义（P<0.01）,M组大鼠组织P-JAK1、P-STAT6表达升高,差异有统计学意义（P<0.05）;与M组比较,Y、SZ-G、SZ-Z组大鼠组织IL-4、P-JAK1、P-STAT6的表达不同程度下降,差异有统计学意义（P<0.05）,以Y、SZ-G组显著;与M组比较,SZ-D组IL-4、P-JAK1表达下降,差异有统计学意义（P<0.05）,而P-STAT6有降低,但变化不明显,差异无统计学意义（P>0.05）。结论:湿疹膏可有效改善AD大鼠皮肤干燥、脱屑、出血、水肿、溃烂、结痂等表观症状,缓解角化过度及角化不全、棘层增厚、棘细胞间水肿、炎性细胞浸润等病理组织变化,恢复皮肤正常组织结构,调节组织中JAK1、STAT6的mRNA及其磷酸化后p-JAK1、p-STAT6的表达,抑制IL-4、IL-5、IL-13、IL-31、TNF-α等与AD相关的关键炎症因子,减少组织炎症损伤,其作用机制可能与干预JAK1-STAT6通路有关。