文献类型：期刊文献

中文题名：麻花秦艽ISSR-PCR反应体系的建立与优化

英文题名：Establishment and Optimization of ISSR-PCR Reaction System for Gentiana straminea

作者：朱田田[1];晋玲[1];张裴斯[1];林丽[1];张弦飞[1]

第一作者：朱田田

机构：[1]甘肃中医学院中藏药资源研究所、甘肃省高校中藏药化学与质量研究省级重点实验室、药用植物遗传育种研究所,兰州730000

第一机构：甘肃中医药大学科研实验中心（甘肃省中医药标准化技术委员会秘书处）

年份：2015

卷号：21

期号：6

起止页码：74

中文期刊名：中国实验方剂学杂志

外文期刊名：Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae

收录：CSTPCD;;北大核心:【北大核心2014】；CSCD:【CSCD_E2015_2016】；

基金：中央本级重大增减支项目(20603020212,20603020110);甘肃省中医药科学技术研究课题重点项目(GZK-2010-Z2)

语种：中文

中文关键词：麻花秦艽;ISSR反应体系;退火温度;UBC-809引物

外文关键词：Gentiana straminea; inter-simple sequence repeat reaction system; annealing temperature; UBC-809 primer

摘要：目的:建立麻花秦艽的简单重复序列区间-聚合酶链反应(ISSR-PCR)最佳反应体系,为该药材的种质鉴定及遗传多样性等研究提供参考。方法:运用单因素试验和正交试验优选麻花秦艽的ISSR-PCR反应体系中DNA模板用量,Mg2+浓度,dNTPs浓度,TaqDNA聚合酶用量和引物浓度等参数,确定麻花秦艽每条引物的最佳退火温度。结果:ISSR-PCR最佳反应体系(20μL)为模板DNA1μL(36mg·L-1),10×PCR缓冲液(含Mg2+)1.75μL(20mmol·L-1),dNTPs0.8μL(10mmol·L-1),Taq酶0.1μL(0.5%)及引物0.6μL(10mmol·L-1);筛选出12条多态性高、扩增稳定的ISSR引物,UBC-809引物的最佳退火温度55.5℃。扩增出的7条带中多态性带为6条,多态性位点比率85.71%。结论:建立的麻花秦艽ISSR-PCR反应体系稳定可靠,位于500bp处的条带为非多态性条带,可作为该种属的特征性条带。
Objective： To establish optimal inter-simple sequence repeat-polymerase chain reaction（ISSR-PCR） reaction system for Gentiana straminea and provide a reference for medicinal germplasm identification and genetic diversity research.Method： Influencing factors of ISSR-RCR reaction system（template DNA,Mg2 ＋,d NTPs,Taq DNA polymerase,primer and annealing temperature） were selected and optimized by single factor tests and orthogonal test.Result： Optimum reaction system（20μL） contained template DNA of 1μL（36mg·L-1）,Mg2 ＋（10 × PCR buffer） of 1.75μL（20mmol·L-1）,d NTPs of 0.8μL（10mmol·L-1）,Taq DNA polymerase of 0.1μL（0.5%） and primers of 0.6μL（10mmol ·L-1）.The suitable annealing temperature of 12 primers was determined, which had rich polymorphism and stable amplification.The best annealing temperature of UBC-809 primer was 55.5 ℃,there were 6 polymorphism bands in amplification of 7bands,the percentage of polymorphism loci reached 85.71%.Conclusion： This established ISSR reaction system is stable and credible.The polymorphic bands,which is located at 500 bp of strip,can be used as the species characteristic band.