文献类型：学位论文

中文题名：盐酸去氢骆驼蓬碱对恶性黑色素瘤的抗肿瘤作用及机制研究

作者：周浩楠[1];

第一作者：周浩楠

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：呼永华;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：盐酸去氢骆驼蓬碱;黑色素瘤B16F10;B16F10;NF-κB通路;免疫

年份：2023

摘要：目的:通过体内实验探究盐酸去氢骆驼蓬碱(Harmine Hydrochloride)对恶性黑色素瘤小鼠是否具有抗肿瘤作用,如果具有抗肿瘤作用,进一步探究盐酸去氢骆驼蓬碱抗肿瘤作用与NF-κB信号通路之间的关系,阐明盐酸去氢骆驼蓬碱对恶性黑色素瘤小鼠抗肿瘤作用的分子机制。方法:通过急性毒性试验并应用Bliss法测定盐酸去氢骆驼蓬碱对C57BL/6小鼠腹腔注射的半数致死量,同时记录各组小鼠中毒相关症状。50只雄性C57BL/6小鼠,SPF级,每只小鼠右腋下接种B16F10细胞悬液0.2m L,细胞数2×10～6/只(1×10～7/m L),构建恶性黑色素瘤荷瘤小鼠模型。在接种第7天,肿瘤生长至5mm×5mm,随机选取2只小鼠,剥离肿瘤进行病理学诊断,提示模型成功。将48只荷瘤小鼠随机分为模型组,阳性对照组,盐酸去氢骆驼蓬碱高、中、低剂量组,每组8只,另设8只为空白组。从接种第7天开始给予各组药物,空白组和模型组分别腹腔注射等体积生理盐水,阳性对照组给予环磷酰胺腹腔注射20mg/kg,盐酸去氢骆驼蓬碱高、中、低剂量组分别按40mg/kg、20mg/kg、10mg/kg给予盐酸去氢骆驼蓬碱连续腹腔注射7天,每天1次。给药期间,记录小鼠体重;在给药开始后第1、3、5、7、9天对各组小鼠的肿瘤长径和短径进行测量,并绘制肿瘤生长曲线;给药结束后,完整剥离肿瘤,计算抑瘤率;采用HE染色观察肿瘤组织的病理学改变;采用ELISA法检测各组小鼠血清测IL-6、TNF-α的水平;采用RT-PCR检测各组小鼠肿瘤组织中IL-6、TNF-α、c-IAP1、c-IAP2 mRNA的表达量;采用Western blot检测各组小鼠肿瘤组织IκBα、p65、p-p65的表达量。结果:1.急性毒性试验结果显示,盐酸去氢骆驼蓬碱的半数致死量(LD50值)为97.570mg/kg,95%可信区间为89.392mg/kg～106.285mg/kg。各组C57BL/6小鼠经腹腔注射盐酸去氢骆驼蓬碱后,均在5min内出现神经系统中毒症状,如震颤、共济失调、角弓反张等,并且中毒的程度和给药的剂量存在剂量依赖性。除死亡小鼠外,其他小鼠均在2-3h后症状缓解。观察14天,剩余的小鼠中毒症状均消失。2.造模结果所有小鼠均成瘤,成瘤率为100%。采用皮下注射肿瘤细胞进行造模,方法简单易行、成功率高,肿瘤从注射细胞后第5天即开始出现肿瘤,第7天即达到可进行实验给药的标准,时间短,可操作性强。3.各组瘤体状态及肿瘤生长曲线各组小鼠的肿瘤均成球体或者不规则样,触之硬且韧,肉眼观察与模型组相比,阳性对照组肿瘤体积均显著减小;盐酸去氢骆驼蓬碱中、高剂量组肿瘤体积均显著减小。将瘤体称重,和模型组相对比,阳性对照组和盐酸去氢骆驼蓬碱中、高剂量组瘤重均下降,差异有统计学意义。盐酸去氢骆驼蓬碱低剂量组抑瘤率为4.24%;盐酸去氢骆驼蓬碱中剂量组抑瘤率为31.31%;盐酸去氢骆驼蓬碱高剂量组抑瘤率为42.73%;阳性对照组抑瘤率为50.83%。肿瘤生长曲线:依据各组肿瘤体积绘制肿瘤生长曲线图,与模型组相比,阳性对照组肿瘤体积均显著减小(P<0.001);盐酸去氢骆驼蓬碱中、高剂量组肿瘤体积均显著减小(P<0.05或P<0.001)。4.病理从病理HE染色结果看,结果显示,模型组的肿瘤细胞排列紧密,坏死区域较少;盐酸去氢骆驼蓬碱低剂量组、中剂量组、高剂量组均可见细胞坏死,且浓度越高肿瘤细胞坏死程度越高;阳性对照组肿瘤细胞可见大片区域坏死。5.血清指标(ELISA)从血清指标来看,模型组小鼠血清中细胞因子IL-6和TNF-α含量显著升高(P<0.01);与模型组对比,阳性对照组和盐酸去氢骆驼蓬碱高、中、低剂量组小鼠血清细胞因子IL-6和TNF-α含量均降低,差异具有统计学意义(P<0.05或P<0.01)。6.组织指标(RT-PCR、Western blot)从肿瘤组织PCR指标来看,与模型组比较,阳性对照组和盐酸去氢骆驼蓬碱高、中、低剂量组IL-6、TNF-α、c-IAP1、c-IAP2均降低(P<0.05或P<0.01);从肿瘤组织Western blot指标来看,阳性对照组和盐酸去氢骆驼蓬碱高、中、低剂量组ik Bα的表达增加(P<0.01),p-p65的表达降低(P<0.05或P<0.01)。结论:在动物水平上,盐酸去氢骆驼蓬碱对恶性黑色素瘤小鼠具有抗肿瘤作用,并且可能通过调控NF-κB信号通路来发挥抗肿瘤作用。