文献类型：学位论文

中文题名：黄芪多糖及联合顺铂抑制小鼠Lewis肺癌术后复发转移的实验研究

作者：刘丹[1];

第一作者：刘丹

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：明海霞;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：Lewis肺癌;术后复发转移;黄芪多糖;顺铂

年份：2019

摘要：目的：通过体内、体外实验观察黄芪多糖抑制小鼠Lewis肺癌细胞及复发瘤转移的影响。　　方法：(一)体外实验：把体外培养的Lewis肺癌细胞按空白对照组、800μg/mL高剂量APS处理组、400μg/mL高剂量APS处理组、200μg/mL中剂量APS处理组、100μg/mL低剂量APS处理组分为五组，各组给药处理48h。选择Transwell检测方法观察在迁移、侵袭实验中Lewis肺癌细胞的穿膜细胞数及体外诱导拟血管形成在血管拟态形成实验中的数量。(二)体内实验：选取80只C57BL/6J小鼠，随机按每组10只分为模型组、低剂量APS处理组(50μg/mL)、中剂量APS处理组(100μg/mL)、高剂量APS处理组(200μg/mL)、阳性对照处理组(6 mg/kg DDP)、低剂量联合处理组(50μg/mLAPS＋3mg/kgDDP)、中剂量联合处理组(100μg/mLAPS＋3mg/kgDDP)、高剂量联合处理组(200μg/mLAPS＋3mg/kgDDP)。将Lewis供瘤组小鼠瘤组织取出，制备成单细胞悬液，在每只小鼠左侧后肢爪垫内侧皮下接种，10天后进行爪垫瘤组织的切除，完成肺癌术后复发转移模型的复制。造模后，第二天均采用腹腔注射0.3mL药物的方式开始给药。所涉及的DDP注射均是1次/周，APS注射均是1次/天，模型组是0.3mL生理盐水1次/天，给药15天后于次日处死。观察指标：(一)体外实验(1)Lewis肺癌细胞迁移、侵袭实验的穿膜细胞数;(2)Lewis肺癌细胞诱导新生血管形成的拟血管数量。(二)体内实验(1)各组小鼠的一般情况;(2)复发瘤质量及抑制率;(3)HE染色下，小鼠术后复发瘤、肺组织的病理学改变;(4)SP检测术后OPN、CD44和CD62P蛋白的表达;(5)Westernblot检测术后MMP-2、MMP-9与TIMP-2蛋白的表达;(6)RT-PCR检测观察术后TIMP-2、MMP-2及MMP-9基因的表达。　　结果：　　(1)与空白组相比，APS各组的Lewis肺癌细胞迁移实验穿膜细胞数均有所降低(P﹤0.05)，以800μg/mLAPS处理组降低最为显著(P﹤0.01)。　　(2)APS各组中Lewis肺癌细胞诱导形成的新生血管管腔数量与空白组相比明显下降(P﹤0.05)，以800μg/mLAPS处理组降低最为显著(P﹤0.01)。　　(3)各组小鼠左后肢均出现大小不一的复发瘤，导致其活动受限，以模型组最为显著。与模型组相比，未给药期间，各组小鼠间体质量变化趋于平稳，差异无统计学意义(P﹥0.05)，自切除瘤体至处死这一给药时间段，差异有统计学意义(P﹤0.05);与模型组比较，各治疗组小鼠的复发瘤重抑制率均有提高，以DDP联合200μg/mLAPS处理组最为明显(P﹤0.05)。　　(4)HE显示：　　复发瘤组织：术后小鼠模型组的瘤组织细胞核大，染色深，周围没有发生坏死。部分瘤细胞发生坏死在各处理组均有出现，其中DDP组表现的最为明显，表现次之的是DDP联合200μg/mLAPS处理组，可以发现大片的坏死和核碎裂，固缩，还可见坏死细胞;肺组织：空白组小鼠肺泡上皮完整，无渗出、水肿、出血;模型组小鼠肺泡上皮细胞部分缺失，肺泡间隔显著增厚，渗出、水肿、出血多见，伴有少量炎性细胞浸润，细胞分化程度低，异型性高。各治疗组相较于模型组，均有不同程度改善，尤以各联合组为主，肺泡上皮细胞缺失不显著，肺泡间隔稍显增厚，渗出、水肿、出血少见，部分区域有纤维组织增生及以淋巴细胞为主的炎性细胞浸润，细胞分化程度较高，异型性较低;(5)免疫组化显示：与模型组相比，各处理组复发瘤组织CD44、CD62P和OPN蛋白均出现表达降低，以DDP组、(100、200)μg/mLAPS联合处理组最为显著，差异有统计学意义(P＜0.05)。　　(6)Westernblot检测表明，与模型组相比，各处理组MMP-2，MMP-9及TIMP-2表达均有所降低，其中以联合(高、中)剂量组MMP-2，MMP-9及TIMP-2表达显著降低。　　(7)RT-PCR检测提示，各处理组MMP-2，MMP-9及TIMP-2的基因表达量都比模型组的表达量低，其中较为显著的是高剂量联合组和中剂量联合组，差异有统计学意义(P＜0.05)。　　结论：APS在一定程度上能够抑制Lewis肺癌细胞的迁移、侵袭，降低Lewis肺癌细胞诱导新生血管形成的能力;APS联合化疗药物DDP在一定程度上可以抑制小鼠肺癌术后的复发、转移，可能与复发转移相关蛋白OPN、CD44、CD62P、TIMP-2，MMP-2及MMP-9等的低表达机制有关。