文献类型：学位论文

中文题名：杜仲腰痛丸对LDH慢性下肢痛模型大鼠镇痛药效及BDNF-Trkb-CREB信号通路的调控研究

作者：张天龙[1];

第一作者：张天龙

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：赵继荣;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：杜仲腰痛丸;腰椎间盘突出症;脑源性神经营养因子;酪氨酸激酶B;环磷腺苷效应元件结合蛋白

年份：2021

摘要：目的：本研究通过建立腰椎间盘突出症（LDH）慢性下肢痛大鼠模型，选用杜仲腰痛丸为目标干预药物，观察杜仲腰痛丸对LDH慢性下肢痛模型大鼠的镇痛效果，并从BDNF-Trkb-CREB信号通路探讨杜仲腰痛丸治疗LDH慢性下肢痛效应可能的脑机制。　　方法：1.行为学实验：SD雄性大鼠72只，随机分为①正常组(Normal组n=24)。②模型组(Model组n=24)。③模型治疗组（ModelTreatment组n=24）。采用自体髓核移植法对模型组、模型治疗组分别进行造模，造模成功后，正常组与模型组给予等量生理盐水灌胃，模型治疗组给予杜仲腰痛丸溶液灌胃，喂药疗程28天。各组大鼠于不同时间节点比较自发行为学评分、机械痛阈值及热痛阈值等行为学变化。以此观察杜仲腰痛丸对模型大鼠的痛阈影响。2.分子生物学实验：在行为学实验成功的基础上，正常组、模型组、模型治疗组随机选取4只大鼠分别于给药前1天和给药后第14天、28天进行大脑海马组织取材，并通过免疫荧光（IF）、实时荧光定量PCR（RT-qPCR）、蛋白免疫印迹（WB）技术考察各组大鼠海马组织中BDNF/Trkb/CREB蛋白及mRNA的表达水平。　　结果：1.自发疼痛行为学评分结果显示，手术前各组SD大鼠做疼痛行为学评分均表现良好(P＞0.05);手术造模后，与正常组比较，模型组及模型治疗组自发性疼痛行为评分在术后2天、7天均显著增高(P＜0.05)，在术后14天时，无统计学意义(P＞0.05)，各组给予药物干预后，与模型组比较，模型治疗组在喂药2天、7天、14天、21天、28天后自发性疼痛行为评分都显著降低(P＜0.05)。2.机械痛阈值结果显示：在手术造模后，与正常组比较，模型组及模型治疗组机械痛阈值在术后2天、7天都显著增高(P＜0.05),在术后14天时，差异不显著(P＞0.05)，整体观察模型组与模型治疗组，模型组的MWT呈升高趋势，说明造模成功后机体逐渐恢复;模型组在喂药21天后MWT趋于稳定，慢性疼痛长期存在，而模型治疗组在杜仲腰痛丸的干预下，MWT值快速升高(P＜0.05)。3.热痛阈值结果显示：在手术造模后，与正常组比较，模型组及模型治疗组热痛阈值在术后2天、7天都显著增高(P＜0.05),在手术后14天（喂药0天时），模型组及模型治疗组PWTL都有不同程度的上升，但是上升幅度较小(P＞0.05)，再给予杜仲腰痛丸药物治疗后，与模型组比较，模型治疗组在喂药2天、7天、14天、21天、28天后PWTL上升显著(P＜0.05)。4.IF检测结果显示：手术造模后，与正常组相比，模型组大鼠海马区中BDNF蛋白及其特异性受体TrKB、CREB的蛋白表达在给药前1天（造模后14天）显著受到抑制，平均荧光强度均减弱，其统计数据具有可比性（P＜0.01）;在药物干预之后，与模型组相比，模型治疗组海马中BDNF，Trkb和CREB蛋白的表达和分布在给药后14天、28天显著增加，平均荧光强度均增强，其统计数据具有可比性（P＜0.01)。5.RT-qPCR结果显示：手术造模后，与正常组比较，模型组、模型治疗组大鼠海马组织中BDNFmRNA、TrkbmRNA、CREBmRNA表达量在给药前1天（造模后14天）显著降低（P＜0.01);与模型组比较，模型治疗组中大鼠海马组织中BDNFmRNA、TrkbmRNA、CREBmRNA表达量在给药前1天增加不显著（P＞0.01);在给药14天、28天后，与正常组相比，模型组大鼠海马组织中BDNFmRNA、TrkbmRNA、CREBmRNA基因表达量维持在较低水平;与模型组比较，模型治疗组大鼠海马组织中BDNFmRNA、TrkbmRNA、CREBmRNA基因表达量在给药14天、28天后均显著升高（P＜0.01)，并逐渐接近正常组水平。6.WB检测结果显示：与正常组相比较，模型组与模型治疗组在造模后即给药前1天BDNF、Trkb、CREB蛋白表达水平都显著下降（P＜0.05);与模型组相比较，模型治疗组在给药前1天BDNF、Trkb、CREB蛋白表达水平变化不大（P＞0.05);随着药物的干预及干预时间的延长，与模型组相比较，模型治疗组BDNF、Trkb、CREB蛋白表达水平在给药后14天、28天都有显著的升高（P＜0.05)。　　结论：杜仲腰痛丸可以有效改善LDH慢性下肢痛模型大鼠的疼痛行为，促进LDH所致的神经功能损伤的修复。杜仲腰痛丸上调了模型大鼠海马区BDNF、TrkB和CREB蛋白及mRNA的表达水平，其治疗LDH慢性下肢痛神经损伤的效应机制可能与激活海马区BDNF-TrkB-CREB信号通路相关。