文献类型：学位论文

中文题名：白藜芦醇对早期糖尿病肾病小鼠肾脏miR-21和smad7表达影响的研究

作者：许丽丽[1];

第一作者：许丽丽

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：黄文辉;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：糖尿病肾病;miR-21;TGF-β1/Smads信号通路;白藜芦醇

年份：2023

摘要：目的:观察白藜芦醇对早期糖尿病肾病小鼠肾脏miR-21和TGF-β1/Smads信号通路的影响,探讨其肾保护作用及其可能机制。研究方法:1.分组:db/db小鼠是自发性2型糖尿病模型,本研究选取7-8周龄雄性db/m小鼠作为正常对照组（NC组,n=6）;12只雄性db/db小鼠作为实验组,适应性喂养2周后测FBG和24h微量白蛋白尿（24h-mALB）,若FBG≥16.7mmol/L,24h-mALB≥30mg,鉴定DN造模成功,将db/db小鼠随机分为糖尿病肾病组（DN组,n=6）、白藜芦醇组（Res组,n=6）。2.给药:白藜芦醇溶于5%的羧甲基纤维素钠溶液,Res组给予白藜芦醇(40 mg·kg·d)灌胃,NC组和DN组均给予同等浓度同等剂量的羧甲基纤维素钠溶液灌胃,规律给药12周。3.一般情况观察和标本采集:每4周监测小鼠的FBG和体重,第10周初和第22周末收集小鼠24h尿测24h-mALB;小鼠麻醉并眼眶取血,分离血清于-80℃保存,用于Scr、BUN测定;留取双肾脏组织标本,称取双肾质量并计算肾脏指数,随后分离出肾皮质,取部分肾组织用4%多聚甲醛固定,进行HE染色、Masson染色和免疫组化学染色,剩余组织于-80℃冰箱备用,qRT-PCR检测小鼠肾脏组织miR-21、TGF-β1、Smad3、Smad7的基因表达水平,Western blot检测小鼠肾组织中TGF-β1、Smad3、Smad7的蛋白表达水平。结果:1.各组小鼠一般情况和常规指标比较:1.1各组小鼠FBG比较:第10周到第22周,NC组小鼠的血糖在正常范围内呈波动性变化;DN组小鼠的血糖始终高于NC组小鼠的血糖（P<0.01）,并随着喂养周期的增加而升高;Res组小鼠第10周和14周的血糖与DN组比较无改善（P>0.05）,第18周和22周时的血糖与DN组血糖比较具有统计学意义（P<0.05）。1.2各组小鼠体重比较:第10周到22周,NC组和DN组小鼠的体重小幅度平稳上升,但DN组小鼠的体重始终高于NC组的体重（P<0.01）;Res组小鼠的体重与DN组小鼠相比较,差异无统计学意义（P>0.05）。1.3各组小鼠24h-mALB比较:第10周和第22周,DN组小鼠24h-mALB的水平显著高于NC组（P<0.01）;Res组24h-mALB水平在第10周高于DN组（P<0.01）,在第22周低于DN组（P<0.01）。1.4各组双肾质量、肾脏指数、FBG、BUN和Scr比较:第22周末,与NC组比较,DN组小鼠的肾脏指数降低（P<0.05）,BUN和Scr均显著增高（P<0.01）;与DN组小鼠相比较,Res组小鼠的BUN和Scr水平有所降低（P<0.05）,肾脏指数变化不大（P>0.05）;双肾质量在三组间无明显差异（P>0.05）。2.各组肾脏病理改变:第22周末,HE显示NC组肾小球毛细血管攀开放良好,肾小管结构正常;和NC组比较,DN组肾小球肥大,肾小球囊腔变窄,系膜增宽,肾小管排列疏松,可见肾小管空泡样变性;和DN组比较,Res组上述病理改变有所改善。Masson染色结果显示NC组肾小球系膜区和肾间质可见少量的蓝染胶原纤维;与NC组相比,DN组肾小球系膜区和肾小管间质蓝染胶原纤维增多,与DN组相比较,Res组蓝染胶原纤维有所减轻。3.各组小鼠肾组织中miR-21、TGF-β1、Smad3和Smad7基因的表达:第22周末,与NC组比较,DN组小鼠肾脏miR-21、TGF-β1、Smad3 mRNA表达水平升高（P<0.01）,Smad7mRNA表达降低（P<0.01）;与DN组比较,Res组小鼠肾脏miR-21、TGF-β1、Smad3 mRNA表达均明显下降（P<0.01）,Smad7 mRNA表达显著升高（P<0.01）。4.各组小鼠肾组织中TGF-β1、Smad3、Smad7的蛋白表达水平:第22周末,与NC组比较,DN组小鼠肾脏TGF-β1、Smad3蛋白表达升高（P<0.01）,Smad7蛋白表达下降（P<0.01）;与DN组比较,Res组小鼠肾脏TGF-β1、Smad3蛋白表达均明显下降（P<0.01）,Smad7蛋白表达明显升高（P<0.01）。5.免疫组化:第22周末,与NC组比较,DN组TGF-β1、Smad3、I型胶原、α-SMA在肾小管间质表达增强,肾小球中表达相当,Smad7在肾小球和肾小管间质中表达减弱;与DN组比较,Res组小鼠肾组织中TGF-β1、Smad3、Smad7、I型胶原和α-SMA的表达差异均有统计学意义（P<0.01）。结论:1.白藜芦醇可改善早期DN模型小鼠的FBG、BUN、Scr、24h-mALB及肾脏病理性损伤,说明白藜芦醇对早期DN有保护作用。2.白藜芦醇对早期DN的保护作用可能与下调miR-21,从而调控Smad7来影响TGF-β1和Smad3的表达有关。