文献类型：学位论文

中文题名：基于网络药理学与分子对接技术探讨宣肺止嗽合剂对COPD大鼠PI3K/AKT信号通路的影响

作者：魏雪艳[1];

第一作者：魏雪艳

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：王新华;甘肃中医药大学|杨震;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：网络药理学;宣肺止嗽合剂;慢性阻塞性肺疾病;炎症;PI3K/AKT信号通路

年份：2024

摘要：目的:通过网络药理学方法和分子对接技术结合动物实验,分析验证宣肺止嗽合剂治疗COPD的作用方式和可能机制。方法:利用TCMSP、OMIM、TTD和Gene Cards数据库筛选分析宣肺止嗽合剂对COPD的作用靶点;进一步用Venny在线平台和String数据库分析药物与靶蛋白的作用方式;对靶分子进行GO基因功能注释和KEGG通路富集分析;借助Auto Dock软件完成分子对接。在完成初步的网络药理学预测后进行动物实验验证,选择60只雄性Wistar大鼠,其中10只作为空白组,其余50只用烟熏(CS)联合气管滴注脂多糖(LPS)诱导COPD模型。待28 d模型成功后,将50只COPD大鼠随机分为模型组、宣肺止嗽合剂高剂量组、宣肺止嗽合剂中剂量组、宣肺止嗽合剂低剂量组、地塞米松组,每组10只。对各给药组连续灌胃(ig)28 d,干预结束后观察各组大鼠一般情况并检测肺功能;采用酶联免疫吸附实验(ELISA)法测定血清中炎性因子IL-6、IL-8、IL-1β、TNF-α的含量;通过苏木素-伊红(HE)染色检测肺组织病理情况;实时荧光定量PCR(Real-time q-PCR)法检测肺组织PI3K、AKT、PIP3、PDK1、IKB、NF-κBp65 m RNA的表达情况;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测肺组织中PI3K、p-PI3K、AKT和p-AKT的蛋白表达水平;免疫组织化学法(IHC)法测定大鼠肺组织中p-AKT、p-NF-κBp65和IKB的阳性表达情况。结果:(1)网络药理学:TCMSP数据库筛选得到宣肺止嗽合剂有效活性成分189个,靶点235个;OMIM、TTD和Gene Cards数据库得到COPD相关靶点1701个;生信分析得到宣肺止嗽合剂与COPD共同靶点119个,其中核心靶点包括AKT1、IL6、TNF等;GO和KEGG富集分析显示,宣肺止嗽合剂治疗COPD主要与PI3K-AKT、TNF、IL-17等信号通路相关;分子对接结果显示主要活性成分与核心靶点间均具有较好的结合活性。(2)动物实验:与模型组比较,宣肺止嗽合剂高、中、低剂量组和地塞米松组大鼠肺功能明显改善(P<0.01);血清中炎性因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α含量显著降低(P<0.05,P<0.01);PI3K、AKT、PIP3、PDK1、NF-κBp65 m RNA表达显著下调(P<0.05,P<0.01),IKB m RNA表达上调(P<0.05,P<0.01);p-PI3K/PI3K、p-AKT/AKT比值显著降低(P<0.01);p-AKT和p-NF-κBp65蛋白阳性细胞数量明显下降(P<0.05,P<0.01),IKB蛋白阳性细胞数量明显升高(P<0.01)。结论:(1)网络药理学:宣肺止嗽合剂主要通过AKT1、IL6、TNF等靶点以及PI3K-AKT、TNF、IL-17等信号通路发挥对COPD的治疗作用;(2)动物实验:宣肺止嗽合剂可能通过下调PI3K/AKT信号通路蛋白的表达,改善大鼠肺功能,缓解肺组织损伤和炎性浸润,抑制血清中炎症因子IL-1β、IL-6、IL-8、TNF-α的含量,从而有效改善COPD大鼠炎症反应。