文献类型：学位论文

中文题名：基于“温经通络法”探讨中药足浴联合远红外线对后肢缺血模型大鼠血管新生的影响及其机制

作者：周志英[1];

第一作者：周志英

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：徐小艳;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：中药足浴;远红外线;后肢缺血;血管新生;温经通络

年份：2025

摘要：目的:通过对后肢缺血大鼠进行中药足浴联合远红外线干预,明确其治疗效果,并探讨该干预措施改善后肢缺血的作用机制。为下肢缺血患者选择无创、简单的治疗、护理方式提供理论和实验依据。方法:(1)选取3月龄SPF级健康成年雄性SD大鼠40只,体重控制在250～300g,适应性饲养一周后,采用左后肢股动脉双结扎离断术构建后肢缺血动物模型,术后血流灌注比例较术前下降75%以上,即认为后肢缺血模型成功;(2)将40只大鼠按照随机数字表法分为5组,分别为假手术组、模型组、中药足浴组、远红外线组、联合治疗组(中药足浴联合远红外线);(3)造模后2天内给予常规饲养,造模后第3天,中药足浴组给予甘肃中医药大学附属医院院内制剂配方足浴,20分钟/次。远红外线组行远红外线照射,25分钟/次。联合治疗组给予每天上午行中药足浴,下午行远红外线治疗,各干预组每天1次,每6天间隔1天,干预28天;(4)造模后第1天、干预后第1、7、14、21、28天测量双侧后肢的皮肤温度,计算每只大鼠双侧后肢的皮肤温度差并观察大鼠基本情况,干预28天后取材,使用HE染色对大鼠左后肢腓肠肌进行组织病理学检测,行免疫组化(CD34)观察样本组织的血管新生情况,通过ELISA对组织样本中的促血管生成因子进行定量分析,包括血管内皮生长因子(VEGF)、转化生长因子-β1(TGF-β1)、缺氧诱导因子-1α(HIF-1α),运用Western Blot检测大鼠缺血腓肠肌中血管内皮生长因子A(VEGFA)、血红素氧合酶-1(HO-1)蛋白表达情况;(5)数据采用SPSS 26.0统计分析软件进行统计学处理。统计作图使用Graph Pad Prism 8。结果:(1)下肢皮肤温度差:实验过程中,假手术组大鼠双下肢皮肤颜色及温度无明显差异,与假手术组相比,模型组下肢皮温差均有统计学意义(P<0.01);造模后第1天以及干预后第1天,与模型组相比,联合治疗组、中药足浴组、远红外线组下肢皮温差均无统计学意义(P>0.05);干预后第7天,与模型组相比,联合治疗组下肢皮温差减小,差异有统计学意义(P<0.05),中药足浴组、远红外线组下肢皮温差均无统计学意义(P>0.05);干预后第14天,与模型组相比,联合治疗组、中药足浴组、远红外线组下肢皮温差均减小,差异有统计学意义(P<0.05),其中,联合治疗组温度差减小较明显(P<0.01);干预后第21天,与模型组相比,联合治疗组、中药足浴组、远红外线组下肢皮温差均减小,差异有统计学意义(P<0.05);干预后第28天,与模型组相比,联合治疗组下肢皮温差减小,差异有统计学意义(P<0.05),中药足浴组、远红外线组下肢皮温差均无统计学意义(P>0.05)。(2)HE染色:干预后第28天,处死大鼠并对手术侧腓肠肌取材,病理切片染色结果中可观察到模型组存在明显的肌原纤维排列紊乱,组织松散,肌纤维断裂等表现;而与模型组相比,联合治疗组、中药足浴组、远红外线组肌细胞形态正常,排列有序,虽然也能看到局灶性肌纤维萎缩坏死,但其损伤程度较模型组显著减轻,与中药足浴组、远红外线组相比,联合治疗组肌肉组织结构保留较完整。(3)免疫组化:干预后第28天取材,通过对血管内皮细胞标志物CD34的组织学染色,评估小静脉和小动脉的形成。结果发现,与假手术组相比,模型组的毛细血管密度升高,差异有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,联合治疗组、中药足浴组以及远红外线组的毛细血管密度升高,差异有统计学意义(P<0.05),其中,联合治疗组及远红外线组明显升高(P<0.01)。(4)ELISA检测结果:干预后第28天,处死大鼠后取材分离肌肉组织匀浆。结果显示,与假手术组相比,模型组大鼠肌肉组织中HIF-1α、TGF-β1、VEGF表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.05),其中,HIF-1α表达水平明显增加(P<0.01);与模型组相比,联合治疗组、远红外线组HIF-1α、TGF-β1、VEGF表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.05),其中,联合治疗组表达水平明显增加(P<0.01),中药足浴组HIF-1α表达水平增加,差异有统计学意义(P<0.05);中药足浴组TGF-β1、VEGF表达水平与模型组相比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(5)Western blot检测结果:干预后第28天,与内参β-actin蛋白对比后,分析后肢缺血大鼠腓肠肌组织中VEGFA、HO-1的蛋白表达水平。结果显示,与假手术组相比,模型组大鼠缺血腓肠肌组织中VEGFA、HO-1蛋白表达均显著上调,差异有统计学意义(P<0.01)。与模型组相比,中药足浴组、远红外线组以及联合治疗组大鼠腓肠肌中的VEGFA、HO-1蛋白表达均上调,差异有统计学意义(P<0.05);其中,远红外线组以及联合治疗组大鼠腓肠肌中的VEGFA、HO-1蛋白表达上调明显(P<0.01)。结果表明,中药足浴以及远红外线通过上调VEGFA、HO-1的表达,以促进血管新生和改善组织供血。结论:(1)中药足浴联合远红外线治疗能改善后肢缺血大鼠的缺血症状,有效减轻肢体缺血性病理损伤,联合治疗效果最佳。(2)中药足浴联合远红外线治疗能协同促进后肢缺血大鼠VEGF、TGF-β1、HIF-1α、VEGFA、HO-1表达,提示HIF-1α/VEGF/TGF-β1通路可能是促血管新生的信号通路之一,且可能与改善下肢组织缺氧、促进内皮细胞的增殖、迁移和分化有关。