文献类型：学位论文

中文题名：sortilin通过RhoA/ROCK/NF-κB信号途径改善高糖诱导的肝脏微循环障碍

作者：曾佩芸[1];

第一作者：曾佩芸

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：刘静;甘肃中医药大学|张琦;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：糖尿病;非酒精性脂肪肝;肝窦内皮细胞;Sortilin;肝脏微循环

年份：2021

摘要：目的:从体内和体外实验两方面共同探讨sortilin在肝脏的表达情况及sortilin在高糖诱导的大鼠肝脏微循环障碍中的可能作用机制及调控途径。方法:建立糖尿病合并脂肪肝Wistar大鼠模型,HE染色和六胺银染色分别观察各组大鼠肝脏组织形态学及基底膜变化,免疫组织化学法检测各组肝组织sortilin的表达差异。体外培养原代大鼠肝窦内皮细胞(rat liver sinusoidal endothelial cells,rLSECs),构建慢病毒sortilin过表达载体(lentiviral sortilin overexpression vector,LV-Sortilin)并转染rLSECs。体外培养rLSECs并用高浓度葡萄糖(25m M,24h)处理,分别使用ROCK抑制剂Y-27632与NF-κB抑制剂PDTC进行干预。MTT比色法用于检测rLSECs活力;Western blotting和RT-PCR技术检测sortilin、RhoA、ROCKⅠ、p65、p-p65、LN和PLVAP的表达水平。采用SPSS25.0软件对实验数据进行统计学分析。结果:1.HE染色显示:糖尿病合并脂肪肝组大鼠肝脏中肝细胞发生明显的脂肪积聚,肝细胞排列极度紊乱,失去正常结构。六胺银染色显示:糖尿病合并脂肪肝组大鼠肝脏基底膜增厚,肝门静脉区域网状纤维融合、增厚、相互缠绕。免疫组织化学染色显示:糖尿病合并脂肪肝组大鼠肝组织中sortilin表达明显减少。2.高糖干预下,rLSECs内sortilin的表达下降(P<0.001),而LN和PLVAP表达增加(P<0.001)。3.重组sortilin过表达载体转染rLSECs逆转了高糖诱导的LN和PLVAP的表达,LN和PLVAP表达下降(P<0.001)。4.ROCK抑制剂Y-27632干预转染细胞后,LN和PLVAP的表达均下降(P<0.001);NF-κB抑制剂PDTC干预转染细胞后,LN和PLVAP的表达在Y-27632干预的基础上进一步降低(P<0.001)。结论:1.高糖状态下,sortilin的下调可通过激活RhoA/ROCK/NF-κB信号通路上调LN和PLVAP的表达,继而诱导肝窦内皮细胞功能障碍,最终导致肝脏微循环障碍。2.LV-Sortilin通过抑制RhoA/ROCK/NF-κB途径的激活从而降低高糖诱导的LN和PLVAP的表达,并最终减轻高糖诱导的肝脏微循环障碍。3.Sortilin激活剂和RhoA/ROCK/NF-κB通路抑制剂可能成为治疗相关代谢性疾病的新晋药物。4.Sortilin有望成为筛选和治疗糖尿病性脂肪肝病的新靶点。