文献类型：学位论文

中文题名：党参多糖对D-半乳糖致衰老小鼠皮肤抗氧化作用及基因表达谱的影响

作者：伍春[1];

第一作者：伍春

机构：[1]甘肃中医学院;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：张帆;甘肃中医学院

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：党参多糖;;皮肤衰老;;抗氧化;;基因芯片;;信号通路

年份：2014

摘要：目的：本实验的目的是观察党参多糖对D-半乳糖致衰老小鼠皮肤组织氧化损伤以及基因表达谱的的影响，探讨党参多糖是否能延缓小鼠皮肤衰老及其分子生物学机制，并进一步探求营卫气虚衰老理论与氧化自由基学说之间的内在联系。 方法：将2月龄昆明种雄性小鼠120只随机分成空白对照组、衰老模型组、党参多糖低剂量组、党参多糖高剂量组和维生素E组；采用D-半乳糖构建衰老小鼠模型，在造模的第11天起开始进行药物干预；给药32天后取材进行指标检测，包括皮肤一般形态学观察，测定皮肤组织中SOD活性、ATP酶活性、MDA含量、LF含量、HYP含量，以观察党参多糖对D-半乳糖致衰老模型小鼠皮肤组织形态及抗氧化能力的影响；应用小鼠全基因组基因芯片技术筛选出党参多糖作用后小鼠皮肤组织中具有显著性表达差异的基因，并分别应用GO数据库、NCBI数据库和KEGG数据库对具有显著性表达差异的基因进行功能分析和信号通路分析；应用RT-PCR技术对基因芯片结果进行验证，检验结果是否真实有效。 结果： （1）皮肤组织病理切片观察结果：与空白对照组比较，衰老模型组小鼠皮肤组织光镜下可见表皮变薄，皮肤附属器及真皮胶原纤维含量明显减少；与衰老模型组比较，党参多糖低、高剂量组及维生素E组小鼠皮肤附属器增加，胶原纤维含量增加且排列较致密。电镜下可见衰老模型组小鼠成纤维细胞核异染色质增多，胞质很少，扩张的粗面内质网及脂褐素颗粒明显增多，胶原纤维减少；党参多糖高剂量组及维生素E组小鼠皮肤细胞粗面内质网无扩张，脂褐素颗粒减少，胶原纤维数量增加；党参多糖低剂量组小鼠皮肤细胞内质网轻度扩张，但胶原纤维明显增加。 （2）党参多糖对衰老小鼠皮肤抗氧化能力相关指标的影响：与空白对照组比较，衰老模型组小鼠皮肤组织SOD活性下降（P<0.05），ATP酶活力下降（P<0.05），MDA及LF含量显著增高（P<0.05），HYP含量显著减少（P<0.05）；与衰老模型组比较，党参多糖高剂量组小鼠皮肤组织SOD活性显著增高（P<0.05），ATP酶活性显著增高（P<0.05）、MDA及LF含量显著减少（P<0.05），HYP含量显著增高（P<0.05）；与维生素E组比较，党参多糖高剂量组小鼠皮肤组织SOD、ATP酶活性、MDA及HYP含量值无明显差异（P>0.05），党参多糖低剂量组介于维生素E组和衰老模型组之间。 （3）党参多糖对衰老模型小鼠皮肤基因表达的影响：党参多糖干预后衰老模型小鼠皮肤组织中有显著性表达差异的基因共有118个，其中85个上调，33个下调，主要涉及的功能包括物质代谢、细胞凋亡、免疫应答、氧化应激、DNA损伤、蛋白修饰、基因转录、皮肤形态等方面；应用KEGG数据库分析经党参多糖作用后显著改变的信号通路，共筛选出6条活性发生显著性改变的信号通路，其中5条上调，1条下调。上调的通路中，差异显著性位于第一位和第二位的是分别与皮肤胶原纤维形成密切相关的ECM信号通路和与皮肤形态密切相关的Focal信号通路。 （4）RT-PCR实验结果证明所验证的基因与基因芯片的结果相吻合，其上调或下调的趋势一致，说明基因芯片的结果真实可靠，能准确地反映各组小鼠基因表达的水平。 结论: （1）本研究结果表明党参多糖能通过改善D-半乳糖致衰老模型小鼠皮肤组织的病理形态，增强抗氧化能力及增加胶原蛋白含量来延缓皮肤衰老。 （2）党参多糖能通过调节小鼠皮肤组织中多个基因及多条信号通路的活性发挥延缓皮肤衰老的作用，揭示了党参多糖是通过多靶点、多途径来延缓小鼠皮肤衰老的。 （3）补益营卫能够延缓小鼠皮肤衰老，中医营卫气虚衰老理论与西医学的氧化自由基学说之间有着密切的联系。