文献类型：学位论文

中文题名：LOX-1通过AMPK/HNF4α信号调控高糖诱导的HLSECs自噬功能

作者：段奇党[1];

第一作者：段奇党

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：刘静;甘肃中医药大学|张琦;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：LOX-1;AMPK;HNF4α;肝窦内皮细胞;自噬

年份：2023

摘要：目的:探讨高糖干预下植物血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体1(Lectin-like oxidized low-density lipoprotein receptor-1,LOX-1)对人肝窦内皮细胞(human liver sinusoidal endothelial cells,HLSECs)自噬功能的影响,以及LOX-1是否通过单磷酸腺苷激活蛋白激酶/肝细胞核因子4α(adenosine monophosphate-activated protein kinase/hepatocyte nuclear factor 4α,AMPK/HNF4α)途径调控自噬。方法:体外培养HLSECs,并用高糖培养基(25mmol/L)处理HLSECs 72h,LOX-1慢病毒RNAi载体(Lentiviral LOX-1-RNAi vector,LV-LOX-1)及慢病毒空载体(Lentivirus control vector,LV-CON)转染HLSECs。分别使用AMPK抑制剂Compound C,HNF4α抑制剂BI-6015,自噬抑制剂(3-methyladenine,3-MA)进行干预,CCK-8检测抑制剂干预后的HLSECs活力并确定各个抑制剂的最佳浓度。透射电子显微镜检测正常组、高糖(high glucose,HG)、HG+LV-LOX-1及HG+LV-CON对HLSECs自噬小体的数量的影响,并使用免疫荧光观察四组细胞中HNF4α的定位。采用RT-PCR、Western blotting分别检测实验各组LOX-1、AMPK、HNF4α、Beclin-1、LC3II/I的m RNA及蛋白的表达。采用SPSS24.0软件对实验数据进行统计学分析。结果:1.在高糖刺激下HLSECs中LOX-1表达增加,而自噬蛋白Beclin-1、LC3II的表达降低(P<0.001),自噬受到抑制。2.高糖降低了AMPK的磷酸化,增加了HNF4α的磷酸化,并使HNF4α滞留在细胞质和细胞核中。3.LV-LOX-1感染增加了pAMPK的表达,降低了p-HNF4α的表达,使HLSECs自噬水平增强,Beclin-1和LC3II的表达增加(P<0.001),并恢复了HNF4α的定位。4.使用AMPK抑制剂Compound C干预转染细胞时,p-HNF4α表达增强,自噬降低;HNF4α抑制剂BI-6015使自噬升高,但不影响AMPK表达,而Compound C和BI-6015都不影响LOX-1的表达;此外使用自噬抑制剂3-MA处理细胞并不影响LOX-1、HNF4α和AMPK的表达(P<0.05)。结论:我们的研究结果揭示了高糖诱导HLSECs自噬的一个新机制,即LOX-1介导的AMPK/HNF4α信号通路。因此,LOX-1是调节HLSECs自噬的一个重要靶分子。