文献类型：学位论文

中文题名：基于网络药理学探究坤泰胶囊调控AGE-RAGE信号通路治疗PCOS模型大鼠的作用机制

作者：黄进格[1];

第一作者：黄进格

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：王芳;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：多囊卵巢综合征;坤泰胶囊;网络药理学;AGE-RAGE信号通路;治疗

年份：2024

摘要：目的:本研究运用网络药理学技术预测和筛选坤泰胶囊（Kuntai Capsules,KTC）治疗多囊卵巢综合征（Polycystic ovary syndrome,PCOS）的作用靶点和效应机制;进一步通过建立PCOS动物模型,探讨并验证KTC基于AGE-RAGE信号通路治疗PCOS模型大鼠的作用机制,以期为临床治疗PCOS提供一定的理论依据。方法:1、网络药理学分析:利用中草药系统药理学平台（Chinese herbal Systems pharmacology platform,TCMSP）和BATMAN-TCM数据库筛选出KTC的有效成分及作用靶点,然后用uniprot数据库对相应靶点基因进行Symbol的转换,Gene Cards、NCBI、Dis Ge NET等数据库筛选疾病靶标,STRING构建PPI蛋白互作网络,通过Network Analyzer工具进行拓扑分析寻找关键靶点,根据MCODE分析进行核心基因的筛选,Cytoscape 3.8.0构建药物-化合物-靶点网络,利用R语言软件进行GO与KEGG富集分析。2、实验研究:选取21日龄SPF级SD大鼠,除对照组外,其余大鼠均采用颈背部皮肤注射脱氢表雄酮（Dehydroepiandrosterone,DHEA）联合高脂饮食（High-fat diet,HFD）的方式进行诱导,建立PCOS大鼠模型,造模28 d。造模成功后,将KTC溶于等量生理盐水分别予以低(0.315 g·kg-1·d-1)、中(0.63 g·kg-1·d-1)、高(1.26 g·kg-1·d-1)剂量进行大鼠灌胃,为KTC低、中、高剂量组,对照组和模型组均给予等量生理盐水,持续灌胃15 d。给药结束后,血糖仪测定空腹血糖（Fasting blood glucose,FBG）;酶联免疫吸附法（Enzyme linked immunosorbent assay,ELISA）测定血清空腹胰岛素（Fasting insulin,FINS）、黄体生成素（Luteinizing hormone,LH）、睾酮（Testosterone,T）、卵泡刺激素（Follicle stimulating hormone,FSH）,计算LH/FSH比值和稳态模型胰岛素抵抗指数（Homeostasis model assessment of insulin resistance,HOMA-IR）;苏木素-伊红(（hematoxylin-eosin,HE）染色观察卵巢组织病理形态;蛋白免疫印迹法（Western blot）和免疫荧光法检测Ⅲ型胶原α1链（COL3A1）、凋亡因子Bcl-2关联X的蛋白（Bcl-2associated X,Bax）和B淋巴细胞瘤-2（B-cell lymphoma-2,Bcl-2）蛋白表达水平;实时荧光定量聚合酶链式反应（real-time PCR,RT-PCR）检测卵巢组织中COL3A1、Bax、Bcl-2 m RNA表达水平。结果:1、网络药理学分析获得KTC有效成分共83种,有效作用靶点共376个;获得PCOS靶点共2010个,KTC治疗PCOS的核心靶点共130个。KTC治疗PCOS的主要核心靶点有AKT1、Bax、Bcl-2、CASP3、COL3A1、FOS、JUN、IL-6等,KTC治疗PCOS主要通过调控AGE-RAGE信号通路、动脉粥样硬化、IL-17信号通路、内分泌抵抗、TNF信号通路、细胞衰老、化学致癌-受体激活、人巨细胞病毒感染、p53信号通路等多个方面的信号通路等途径实现。2、动物实验验证2.1大鼠体质量增长率、血清性激素及糖代谢结果显示:与对照组相比,模型组大鼠体质量增长率、FBG、FINS、LH、T、LH/FSH、HOMA-IR水平均升高（P<0.05或P<0.01）,FSH水平下降（P<0.05）;与模型组相比,KTC低、中、高剂量组大鼠体质量增长率水平均降低（P<0.05或P<0.01）,FBG、FINS、LH、T、LH/FSH、HOMA-IR水平均下降（P<0.05或P<0.01）,KTC中、高剂量组FSH水平升高（P<0.05或P<0.01）。2.2大鼠动情周期监测:与对照组相比,PCOS模型组大鼠动情周期紊乱,其阴道脱落细胞可见大量白细胞,以动情间期为主;与模型组相比,KTC低、中、高剂量组大鼠逐渐出现稳定的动情周期。2.3 HE染色结果显示:与对照组相比,PCOS模型大鼠卵巢内无成熟卵泡形成,卵泡呈囊性扩张,黄体数量显著降低,颗粒细胞排列疏松且层数减少。与模型组相比,中药KTC三组卵巢表面较光滑,卵巢组织可见卵母细胞及成熟卵泡,颗粒细胞层厚度增加。2.4 Western Blot和免疫荧光染色法结果显示:与对照组相比,卵巢组织中COL3A1、Bax蛋白表达水平上升（P<0.01）,Bcl-2蛋白表达水平降低（P<0.01）;与模型组相比,KTC低、中剂量组COL3A1蛋白表达水平下降（P<0.05或P<0.01）,KTC低剂量组Bax蛋白表达水平下降（P<0.05或P<0.01）、Bcl-2蛋白表达水平上升（P<0.01）。2.5 RT-PCR结果显示:与对照组相比,卵巢组织中COL3A1、Bax m RNA表达水平上升（P<0.05）;与模型组相比,KTC低剂量组COL3A1、Bax m RNA表达水平下降（P<0.05）,Bcl-2 m RNA表达水平上升（P<0.05）。结论:1、坤泰胶囊治疗PCOS核心靶点有AKT1、Bax、Bcl-2、CASP3、COL3A1、FOS、JUN、IL-6等,核心靶基因主要富集在AGE-RAGE信号通路、Endocrine resistance、IL-17信号通路、Chemical carcinogenesis-receptor activation、Hepatitis C、TNF信号通路、P53信号通路等。2、KTC可能通过调节AGE-RAGE信号通路,抑制卵巢颗粒细胞凋亡,减少卵泡闭锁,促进胰岛素分泌,降低血糖和体质量,恢复血清激素水平,改善PCOS的症状,减轻卵巢形态学损伤,恢复卵巢功能,KTC对PCOS的治疗具有重要价值。