文献类型：学位论文

中文题名：三黄凝胶对大鼠耳廓复合痤疮模型及p38MAPK信号通路关键分子的影响

作者：李丹[1];

第一作者：李丹

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：王思农;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：痤疮;三黄凝胶;大鼠耳廓复合痤疮模型;p38MAPK信号通路;炎症反应

年份：2022

摘要：目的:本研究通过复制大鼠耳廓复合痤疮模型,观察外用三黄凝胶前后大鼠耳廓变化,检测p38MAPK及其效应蛋白MKK3、MKK6,促炎因子MCP-1、HMGB1和纤维化标志性蛋白α-SMA的表达,探究三黄凝胶基于p38MAPK信号通路抑制炎症反应、降低炎症损伤的作用机制,为三黄凝胶进一步的开发应用提供科学依据。方法:将62只SPF级Wistar雄性大鼠正常食水适应性喂养一周后,按随机数字表法取10只为空白组(K),其余52只为造模组,参考Kligman法复制痤疮实验动物模型(即右耳外涂100%油酸+耳廓皮下注射P.acnes菌液),21天后随机抽取造模组2只做HE染色进行镜下观察,确认造模成功后将造模组分为模型组(M)、阳性对照组(Y)、三黄凝胶高剂量组(SH-G)、中剂量组(SH-Z)、低剂量组(SH-D),每组各10只;Y组给予维A酸乳膏(0.02g/cm/d),SH-G组、SH-Z组、SH-D组分别给予不同浓度的三黄凝胶(0.044、0.022、0.011g/cm/d),K组涂抹空白凝胶基质(0.02g/cm/d),每日1次,连续用药28天,模型组不予任何处理;治疗期间分别于第7、14、28天从耳廓肿胀厚度、皮色变化、表皮角化程度、丘疹脓疱方面,对各组大鼠右侧耳廓外观及形态进行观察评价;采用HE染色镜下观察组织病理学变化,逆转录聚合酶链式扩增反应(RT-PCR)检测耳廓组织p38MAPK、MKK3、MKK6m RNA的表达,蛋白免疫印迹法(WB)和免疫组织化学法(IHC)检测耳廓组织中促炎因子MCP-1、HMGB1和纤维化蛋白α-SMA的表达。结果:1.一般情况观察:与K组相比,M组可见右侧全耳肿胀明显,皮温较高,呈暗红色,表皮粗糙覆盖大量角化物及痂皮,有明显脓疱、丘疹;与M组对比,各治疗组大鼠耳廓颜色变浅、肿胀消退、表面痂皮鳞屑脱落,丘疹脓疱较前减少,且Y组、SH-G组耳廓组织基本恢复正常,与K组无较明显差异。2.组织病理学观察:与K组比较,M组大鼠耳廓组织结构破坏明显,表皮角化过度,炎性细胞浸润明显,毛囊口扩张并堆积大量角化物,部分毛囊结构破坏,有丘疹脓疱形成;与M组比较,各治疗组耳廓组织结构基本恢复正常,表皮角化有不同程度减轻,棘层组织变薄,炎症细胞浸润、毛细血管扩张均有改善,尤以Y组和SH-G量组改变最明显。3.表观指标评分:组内比较:与K组相比,M组大鼠治疗期间各时间点表观评分无明显改变(P>0.05),与M组相比,各治疗组不同时间节点耳廓表观评分均有改善。组间比较:在治疗第7d,与M组相比较,Y组、SH-G组、SH-Z组皮损均有改善,(P<0.05)差异有统计学意义,SH-D组表观评分变化不明显,(P>0.05)差异无统计学意义;治疗第14d,与M组对比各治疗组皮损明显改善,(P<0.05)差异有统计学意义,尤以Y组与SH-G组改善明显,(P>0.05)差异无统计学意义;治疗第28d,各治疗组大鼠皮损评分明显下降,Y组与SH-G组、SH-G组与SH-Z组比较,(P>0.05)差异无统计学意义。4.耳廓组织相关指标检测:(1)免疫组化结果显示:与K组相比,M组耳廓组织中MCP-1、HMGB1、α-SMA的表达明显升高,(P<0.05)差异有统计学意义;与M组相比,Y组、SH-G组和SH-Z组大耳廓组织中MCP-1、HMGB1、α-SMA的表达均有不同程度降低,(P<0.05)差异有统计学意义;SH-D组MCP-1、HMGB1的表达均有下降,(P<0.05)差异均有统计学意义,而α-SMA含量无明显变化,(P>0.05)差异有统计学意义。(2)WB结果显示:与K组相比,M组耳廓组织中MCP-1、HMGB1、α-SMA蛋白表达水平明显升高,(P<0.05)差异均有统计学意义;与M组相比,Y组、SH-G组、SH-Z组大鼠耳廓中MCP-1、HMGB1、α-SMA的蛋白表达均有降低,差异具有统计学意义(P<0.05);SH-D组与M组对比,大鼠耳廓组织中MCP-1、HMGB1的蛋白表达下降,差异有统计学意义(P<0.05),而α-SMA表达虽有下降趋势,但差异无统计学意义(P>0.05)。(3)RT-PCR结果显示:与K组相比,M组耳廓组织中p38MAPKm RNA及其磷酸化效应蛋白MKK3、MKK6m RNA的表达明显升高,(P<0.05)差异有统计学意义;与M组比较,Y组、SH-G组、SH-Z组p38MAPK、MKK3、MKK6的m RNA表达均有下降,差异有统计学意义(P<0.05),SH-D组p38MAPKm RNA、MKK6m RNA表达虽有一定程度下降,但降低不明显,(P>0.05)差异无统计学意义。结论:三黄凝胶可有效改善大鼠耳廓肿胀程度,恢复耳廓皮色,减少角化物堆积和丘疹脓疱形成,调节耳廓组织中p38MAPK、MKK3、MKK6表达,抑制重要炎症因子MCP-1、HMGB1产生和维化标志蛋白α-SMA活化,缓解P.acnes诱导下炎症反应状态,减少组织炎症损伤,探究其作用机制可能与干预p38MAPK通路磷酸化有关。