文献类型：学位论文

中文题名：红芪超滤物对X线辐射肝癌HEPG2细胞自噬性凋亡及P53基因表达的影响

作者：郭晓蓥[1];

第一作者：郭晓蓥

机构：[1]甘肃中医学院;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：李应东;甘肃中医学院

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：红芪超滤物;X射线辐射;人肝癌HEPG2细胞;P53基因

年份：2012

摘要：目的：探讨红芪超滤物对于直线加速器（X射线）辐射后人肝癌HEPG2细胞的细胞周期，凋亡及其P53基因表达的影响，为应用红芪超滤物辅助临床放疗增敏治疗肿瘤提供实验依据。 方法：取密度为1×106个/ML肝癌HEPG2细胞用于实验。实验分为5组，设1个对照组（C）即正常对照组，1个纯辐射组(R)给以源皮距100CM 4GY的X射线，另设1个单纯加药组(D)给予药物剂量为 50MG/L，1个先辐射后加药组(R+D)先给予 4GY的射线照射后给予50MG/L浓度药物，1个先加药后辐射组（D+R）给予50MG/L药物培养24小时后再给予射线照射。光学显微镜下观察细胞外部形态；在电镜下观察细胞超微结构；CCK-8法检测细胞生长抑制率；用流式细胞仪检测细胞周期变化；并采用RT-PCR法检测细胞中P53MRNA基因表达情况。 结果：（1）CCK-8法检测结果：经红芪超滤物作用后的肝癌细胞其OD值降低并呈药物浓度依赖关系（P<0.01）。提示其对于人肝癌HEPG2细胞具有抑制增殖作用。(2)流式结果显示：红芪超滤物与X射线（4GY）联合作用HEPG2细胞48H后，各组肝癌细胞较对照组而言G0/G1期细胞数均增多，S期细胞减少（P<0.01）；其中R+D组和D+R组细胞G0/G1期阻滞最为明显，细胞数由36.6%分别上升至62.75%、52.7%，凋亡率增加（P<0.01），R+D组G0/G1期细胞数多于D+R组（P<0.05），说明药物预先处理组(R+D)的周期阻滞作用强于辐射后加药组(D+R)。红芪超滤膜提取物与X射线有协同作用，共同作用于肝癌细胞，可将细胞周期阻滞于G0/G1期，延迟S期，诱导细胞凋亡。（3）光镜下形态学观察：C组细胞形态呈多边形，细胞间排列紧密，细胞大小不一，异形性明显，细胞膜完整光滑；D组外形并无明显改变，但密度明显下降；R组细胞排列松散，细胞间隙增大，密度进一步下降；R+D组细胞形态不规则，排列更为松散，细胞体积明显缩小；D+R组细胞大多已成圆形，表面散在空泡，仅见模糊的细胞大体轮廓，核染色质边集。（4）电镜下形态学观察：C组细胞形态规则，核染色质分布均匀，核仁清晰，细胞膜完整；D、R 组细胞核染色质密度增高，凝聚在核膜周边，细胞膜皱缩粗糙不完整；R+D组细胞核染色质边集、浓缩、线粒体肿胀、内质网扩张，出现空泡变性；D+R组细胞线粒体进一步肿胀，空泡变性加重，有细胞自噬现象发生，细胞形态改变明显。（5）P53MRNA基因表达：RT-PCR结果显示使用红芪超滤物预处理后辐射组较纯辐射组细胞P53基因表达明显增强。 结论：红芪超滤物（10 万分子量）对人肝癌 HEPG2细胞具有细胞毒性作用，能够抑制肿瘤细胞增殖，与X射线共同作用能提高人肝癌HEPG2对辐射的敏感性。