文献类型：学位论文

中文题名：白假丝酵母菌抗原在外阴阴道假丝酵母菌病中免疫原性的研究

作者：杨楠[1];

第一作者：杨楠

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：刘会玲;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：白假丝酵母菌;外阴阴道假丝酵母菌病;重组蛋白;免疫原性

年份：2024

摘要：目的利用生物信息学分析技术筛选白假丝酵母菌抗原,研究其在外阴阴道假丝酵母菌病(vulvovaginal candidiasis,VVC)中的免疫原性,为后续开发多价疫苗及糖结合疫苗的可行性提供实验数据。方法1.应用NCBI、CGD、AlphaFold2、VaxiJen、Expasy、IEDB等网络数据库,对编码白假丝酵母菌蛋白的基因序列、蛋白序列、蛋白结构、蛋白抗原性、蛋白理化性质、蛋白免疫表位等生物学信息进行查找、分析,寻找其作为目的抗原的生物信息学依据;2.根据预测结果,筛选出目的抗原,构建以大肠杆菌为宿主的重组表达载体,通过大肠杆菌表达系统诱导目的蛋白表达,使用His标签纯化方法得到目的蛋白,纯化后的目的蛋白通过Western Blot验证;3.收集临床确诊VVC、RVVC患者以及正常人的血清标本及阴道分泌物标本,通过ELISA实验检测血清样本中抗原特异性抗体Ig G以及阴道分泌物样本中抗原特异性抗体s Ig A的水平。结果1.通过文献查阅和生物信息学分析筛选出了十五个蛋白作为白假丝酵母菌重组蛋白疫苗构建的候选抗原;2.通过生物信息学数据库预测、筛选免疫原性高、亲水性强、结构稳定、覆盖尽可能多的免疫优势表位的蛋白,最终构建了Eno1、Sap6p、Ywp1p共三个带His标签的单个蛋白,其中Eno1、Sap6p在E.coli BL21(DE3)中分别呈可溶性表达和包涵体表达,Ywp1p在Rosetta(DE3)中呈可溶性表达,通过His标签纯化,得到了纯度较高的目的蛋白,经WB验证,三个目的蛋白均成功纯化;3.ELISA检测血清特异性抗体Ig G,其中,Eno1蛋白的VVC组和正常组有显著统计学差异(P<0.01),RVVC组和正常组、VVC组和RVVC组均无统计学差异,Sap6p蛋白的VVC组和正常组有显著统计学差异(P<0.001),RVVC组和正常组、VVC组和RVVC组均无统计学差异,Ywp1p蛋白VVC组、RVVC组和正常组之间均无统计学差异,Eno1、Sap6p、Ywp1p蛋白均未检测到阴道分泌物中抗原特异性抗体s Ig A。结论本实验成功构建并表达了含His标签的重组蛋白Eno1、Sap6p、Ywp1p,制备出了纯度较高的目的蛋白;ELISA检测血清特异性抗体IgG水平表明,Eno1和Sap6p可以作为白假丝酵母菌疫苗的候选抗原。