文献类型：学位论文

中文题名：龙胆泻肝丸联合人干扰素α2b凝胶对湿热下注型高危型HPV感染的临床疗效观察

作者：黄园[1];

第一作者：黄园

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：赵粉琴;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：湿热下注型高危型人乳头瘤病毒感染;龙胆泻肝丸;人干扰素α2b凝胶;HPVE6/E7mRNA表达量;网络药理学

年份：2025

摘要：目的:本课题基于网络药理学探究龙胆泻肝丸治疗湿热下注型带下病作用靶点以及分子对接机制,通过临床病例验证龙胆泻肝丸对湿热下注型HR-HPV感染女性阴道微生态、TCT、宫颈组织蛋白表达水平、宫颈组织p16蛋白表达、宫颈局部炎性因子表达、HPVE6E7mRNA表达量以及中医证候积分的影响,明确龙胆泻肝丸治疗湿热下注型HR-HPV感染的作用机制。方法:一、网络药理学分析1.活性成分与靶点筛选:（1）基于TCMSP数据库,筛选龙胆泻肝丸10味中药（如龙胆、黄芩、栀子等）的潜在活性成分,设置筛选条件为口服生物利用度（OB）≥30%和类药性（DL）≥0.18。（2）通过Uni Prot数据库标准化活性成分对应的人源靶点基因名称。（3）从Gene Cards、OMIM等数据库获取HR-HPV相关基因,利用微生信平台与药物靶点基因取交集,获得共作用靶点。2.网络构建与分析:（1）使用Cytoscape 3.8.2构建“药物-成分-靶点”网络图,分析核心活性成分及关键靶点。（2）通过STRING数据库进行蛋白质-蛋白质相互作用（PPI）网络分析,筛选度值（Degree）排名前10的核心靶点。（3）利用DAVID工具对交集靶点进行GO功能富集分析（生物过程、分子功能、细胞组分）和KEGG通路富集分析,明确龙胆泻肝丸治疗HR-HPV的潜在机制。3.分子对接验证:（1）从PDB数据库下载核心靶点（如IL-6、STAT3、VEGFA等）的晶体结构,使用PyMOL软件去除水分子及配体。（2）通过Auto Dock Vina软件将核心活性成分（如黄芩素、栀子苷等）与靶蛋白进行分子对接,设置对接箱格覆盖活性位点,结合能≤-5 kcal/mol视为稳定结合。（3）对接结果通过PyMOL可视化,展示结合位点及氢键相互作用。得到龙胆泻肝丸治疗湿热下注型HR-HPV感染的潜在生物学过程及相关信号通路,预测评价核心靶点与其对应的活性成分间的结合能力及稳定性;并进行临床试验检验龙胆泻肝丸联合人干扰素α2b凝胶对湿热下注型HR-HPV感染的临床疗效观察。二、临床试验设计1.研究对象与分组:纳入100例符合本研究纳入标准的湿热下注型HR-HPV感染患者,随机数字表法分为:西药组（n=50）:给予人干扰素α2b凝胶阴道给药（1次/日）;中西医结合组（n=50）:给予人干扰素α2b凝胶阴道给药（1次/日）联合龙胆泻肝丸口服（6g/次,2次/日）。治疗周期均为3个月,停药后第6个月随访。2.观察指标:（1）HPV E6/E7 mRNA表达量;（2）阴道微生态状况（菌群多样性、密集度、p H值等）;（3）TCT;（4）宫颈组织IL-1β、IFN-γ、IL-6蛋白表达水平;（5）宫颈局部炎性因子IL-2、IFN-γ、IL-6、IL-10表达水平;（6）宫颈组织p16蛋白表达;（7）中医证候积分等指标。3.数据统计与分析:采用SPSS 25.0统计软件进行数据处理,计量资料以“均值±标准差”表示,组间比较采用独立样本t检验或重复测量方差分析;计数资料采用χ2检验或Fisher精确检验。以P<0.05为差异有统计学意义,多时间点数据采用Bonferroni校正。结果:一、网络药理学机制研究结果1.关键靶点与通路富集分析:（1）通过微生信平台筛选获得龙胆泻肝丸活性成分与HR-HPV感染的共作用靶点80个,拓扑分析确定核心靶点AKT1、SRC、STAT3、EGFR、ESR（Degree值>10）。（2）KEGG通路富集显示核,心靶点显著富集于癌症相关通路、细胞衰老、Fox O信号通路、MAPK及PI3K-AKT等信号通路,提示药物可能通过调控病毒致癌基因与宿主免疫微环境互作发挥治疗作用。2.分子对接与结合稳定性验证:核心活性成分（山奈酚、槲皮素、甘草查尔酮B等）与关键靶蛋白（AKT1、STAT3等）分子对接结果显示:（1）AKT1-槲皮素结合自由能ΔG=-4.01 kcal/mol,形成3条氢键（Lys158、Glu191、Asp292）;（2）STAT3-甘草查尔酮B结合自由能ΔG=-4.63 kcal/mol,关键疏水相互作用涉及Phe716、Leu718残基;（3）分子动力学模拟（100 ns）证实复合物体系均方根偏差（RMSD）<2.0（?）,表明具有较高的结合亲和力及稳定性。二、临床疗效观察结果1.基线特征与可比性分析:两组患者基线数据（首次性交年龄、避孕方式、吸烟史等一般资料）均无统计学差异（P>0.05）,组间均衡性良好,可进行后续疗效比较分析。2.治疗后,两组患者的阴道菌群多样性和密集度（Ⅱ-Ⅲ级）、乳杆菌数量以及阴道p H值（≤4.5）显示,西药组差异无统计学意义（P>0.05）,中西医结合组差异有统计学意义（P<0.01）。3.治疗后,两组患者阴道过氧化氢、白细胞酯酶、唾液酸苷酶阴性人数均有所上升,但西药组差异未达统计学意义（P>0.05）,中西医结合组差异有统计学意义（P<0.01）。4.治疗后,两组患者阴道毛滴虫和真菌菌丝、芽生孢子、支原体、衣原体感染人数均减少,除外阴阴道假丝酵母菌病差异无统计学意义外（P>0.05）,其余差异均有统计学意义（P<0.05）。5.治疗后,两组患者HR-HPV转阴率均增高（P<0.05）,中西医结合组转阴率显然高于西药组（P<0.01）。6.治疗前两组患者宫颈组织IL-1β、IFN-γ、IL-6蛋白表达水平比较均无统计学意义（P>0.05）,具有可比性,治疗后中西医结合组IFN-γ蛋白表达水平较治疗前显著升高,IL-6、IL-1β蛋白表达水平较治疗前显著降低,具有显著统计学差异（P<0.01）。7.治疗后,两组宫颈组织p16蛋白表达水平均有转阴（P<0.05）,其中中西医结合组转阴人数多于西药组,差异有统计学意义（P<0.01）。8.两组患者治疗前检测宫颈局部炎性指标比较均无统计学意义（P>0.05）,具有可比性,治疗后中西医结合组IL-2、IFN-γ水平较治疗前显著升高,IL-6、IL-10水平较治疗前显著降低,具有显著统计学差异（P<0.01）。9.治疗后,两组患者HPVE6/E7mRNA表达量均有降低或转阴（P<0.05）,中西医结合组表达量降低幅度高于西药组（P<0.01）。10.治疗后,两组中医证候积分均较治疗前显著下降（P<0.05）,中西医结合组在中医证候改善方面明显优于西药组（P<0.01）。11.治疗后,对比两组患者的临床疗效,西药组总有效率达76.00%,中西医结合组总有效率为96.00%,相较于西药组,中医相结合组综合疗效的差异在统计学上有显著意义（P<0.01）。12.结果整合与机制关联—“网络预测-临床验证”一致性（1）网络药理学预测的PI3K-AKT和MAPK通路抑制及IL-6下调机制,与临床观察到的宫颈组织IL-6降低（P<0.01）、IFN-γ升高（P<0.01）高度吻合。（2）核心成分槲皮素、山奈酚等对EGFR、SRC靶点的抑制作用,可能通过调控宿主细胞增殖与病毒整合协同增强HPV清除。结论:1.持续性HR-HPV感染可能与宫颈局部炎性变化有关。2.持续性HR-HPV感染导致宫颈局部E6E7蛋白的高表达与宫颈局部促炎因子水平高度表达相关。3.龙胆泻肝丸通过多成分、多靶点调控MAPK通路,协同发挥抗炎、免疫增强、促凋亡及抗氧化作用,改善阴道微生态,降低宫颈局部促炎因子（如IL-10、IL-6）的释放,升高宫颈局部抑炎因子（如IL-2、IFN-γ）的释放,从而间接抑制HPV病毒的复制,使HPVE6/E7mRNA表达量降低。