文献类型：学位论文

中文题名：可吸入细颗粒物诱导脑组织LOX-1/NF-κB的表达与缺血性脑卒中的相关性研究

作者：李伟[1];

第一作者：李伟

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：柴尔青;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：缺血性脑卒中;可吸入细颗粒物;LOX-1;NF-κB p65;动脉粥样硬化

年份：2023

摘要：目的:近年来,大量流行病学研究发现可吸入细颗粒物(Particulate Matter,PM)与缺血性脑卒中(Ischemic Stroke,IS)密切相关。本研究通过观察PM2.5暴露后对缺血再灌注(Ischemia-reperfusion,I/R)大鼠脑梗死体积、神经功能评分、脑组织内LOX-1、NF-κB p65蛋白的表达以及颈内动脉血管形态的影响,探讨PM2.5加重脑缺血损伤的机制,为IS的治疗及预防提供理论依据。方法:选取雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠90只,体重200g-250g,在SPF级别实验室饲养1周后随机分为5组,第1组为对照组,大鼠鼻腔滴入一定体积的灭菌生理盐水4周;第2组为I/R组,大鼠鼻腔滴入等体积的灭菌生理盐水4周后给予大鼠大脑中动脉栓塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)手术处理,其余3组分别为I/R+PM2.5低浓度组、I/R+PM2.5中浓度组、I/R+PM2.5高浓度组,大鼠鼻腔分别滴入浓度为1.25mg/ml、6.25mg/ml、31.25mg/ml的等体积PM2.5染毒液4周后给予MCAO手术处理。大鼠鼻腔每次滴入的药物体积为20ul,给药频率为隔天一次。各组大鼠MCAO术后24小时、48小时参照zea-Longa评分法进行神经功能缺损评分。大鼠处死后采用2,3,5—氯化三苯基四氮唑(2,3,5-Triphenyltetrazolium chloride,TTC)染色检测大鼠脑梗死体积;Western blotting法检测大鼠缺血半暗带区脑组织凝集素样氧化低密度脂蛋白受体-1(Lectin-Like Oxidized Low-Density Lipoprotein Receptor 1,LOX-1)、核因子κB p65(Nuclearfactorkappa-B,NF-κB p65)的表达;免疫荧光法检测大鼠缺血半暗带区脑组织LOX-1、NF-κB p65的表达;化学试剂盒检测缺血半暗带区脑组织活性氧(Reactive oxygen species,ROS)、脑组织超氧化歧化酶(Superoxide Dismutase,SOD)的表达;酶联免疫吸附测定法(Enzyme-Linked Immuno Sorbent Assay,ELISA)检测大鼠血清中炎症因子白介素(Interleukin,IL)-1α、IL-1β、IL-18、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的表达;苏木精-伊红(Hematoxylin-eosin,HE)染色法观察大鼠颈内动脉形态学的变化情况。结果:1.大鼠神经功能缺损评分:对照组大鼠采取相同的手术经过,但未进行大脑中动脉栓塞,大鼠神经功能缺损评分均为0分。与对照组比较,I/R及I/R+PM2.5染毒组大鼠出现神经功能缺损症状(P<0.001)。与I/R组比较,I/R+PM2.5中、高浓度组PM2.5暴露后大鼠神经功能缺损症状相对加重(P<0.05)。I/R+PM2.5低浓度组PM2.5暴露后大鼠神经功能缺损与I/R组比较未见明显差异。2.大鼠脑梗死体积:对照组大鼠TTC染色后未见梗塞灶。与对照组比较,I/R及I/R+PM2.5染毒组大鼠脑组织出现明显的梗塞灶(P<0.001)。与I/R组比较,I/R+PM2.5中、高浓度组PM2.5暴露后大鼠脑梗死体积相对增加(P<0.05)。I/R+PM2.5低浓度组PM2.5暴露后脑梗死体积与I/R组比较未见明显差异。3.大鼠血清炎症因子表达:与对照组比较,I/R组及I/R+PM2.5染毒组明显增加了大鼠血清中IL-1a、IL-1β、IL-18、TNF-a炎症因子的表达(P<0.05)。与I/R组比较,I/R+PM2.5中、高浓度组PM2.5暴露后大鼠血清中IL-1a、IL-1β、IL-18、TNF-a炎症因子的表达水平进一步增高(P<0.05),I/R+PM2.5低浓度组PM2.5暴露后选择性的增加了血清中TNF-a的表达水平(P<0.05)。4.大鼠脑组织ROS、SOD的表达:与对照组比较,I/R及I/R+PM2.5染毒组大鼠脑组织ROS表达明显增高,SOD活力明显降低(P<0.05)。与I/R组比较,PM2.5暴露后各组大鼠脑组织ROS的表达相对增加,SOD的活力相对降低(P<0.05)。5.大鼠脑组织LOX-1、NF-κB p65的表达:与对照组比较,I/R及I/R+PM2.5染毒组大鼠脑组织LOX-1、NF-κB p65蛋白表达增加(P<0.001),与I/R组比较,PM2.5暴露后进一步上调脑组织LOX-1、NF-κB p65蛋白表达水平(P<0.001)。6.大鼠颈内动脉HE染色:各组大鼠颈内动脉并未发现明显动脉粥样硬化,但是与Contr组及I/R组相比,各PM2.5暴露组大鼠颈内动脉出现不同程度的血管内皮结构破坏、弹性纤维断裂等病理损伤。结论:1.PM2.5暴露后加重了脑缺血再灌注损伤,增加了神经功能缺损评分,增大了脑梗死灶的体积。2.PM2.5暴露后升高了血清中炎症因子表达水平,增加了脑内氧化应激损伤,上调了脑组织LOX-1、NF-κB p65蛋白表达,并且PM2.5暴露浓度越高,各因子表达水平越高。3.PM2.5暴露后对脑组织及神经功能损害作用可能与通过上调LOX-1、NF-κB p65炎症介质的促炎和促氧化作用有关。4.不同浓度PM2.5暴露4周后大鼠颈内动脉并未发生明显的动脉粥样硬化,但出现不同程度的病理损伤。