文献类型：学位论文

中文题名：红景天苷对模拟高原低氧环境雄性大鼠生殖系统损伤的保护作用研究

作者：张喜艳[1];

第一作者：张喜艳

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：王玲;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：红景天苷;模拟高原低氧环境;氧化应激;生殖系统

年份：2022

摘要：目的1.观察模拟海拔6000米高原低氧环境下持续暴露对雄性Wistar大鼠生殖系统的影响;2.研究红景天苷对模拟高原低氧环境下雄性Wistar大鼠生殖系统损伤的保护作用。 方法1.将60只10周龄雄性Wistar大鼠按随机数字表法编号后,随机选取10只大鼠饲养于第九四〇医院动物实验科(海拔1470m)的常氧环境中,设为平原组(A组),将剩余50只大鼠置于模拟海拔高度6000m环境的低压氧动物实验舱中持续暴露30天,构建高原生殖损伤模型,干预期满后,大鼠出舱,按照随机数字表法随机分为高原组(B组)、阴性对照组(生理盐水:1ml/100g)(C组)、阳性对照组(复方玄驹胶囊悬浊液0.3906 mg/kg/d)(D组)、低剂量治疗组(红景天苷悬浊液:10mg/kg/d)(E组)、高剂量治疗组(红景天苷悬浊液:40 mg/kg/d)(F组),每组10只,B组大鼠于干预期满后当日在低压氧舱实验舱立即取材,C、D、E、F组大鼠出舱后饲养于动物实验科(海拔1470m)的常氧环境中,给予相应灌胃措施处理,灌胃干预满15天后水合氯醛麻醉后取材。2.取大鼠双侧睾丸组织称重后于液氮中保存备用;分离双侧的附睾尾制备成精子悬液,涂片后显微镜下计数精子数量和精子活动率、染色后在显镜观下观察精子畸形率、精子存活率。3.将各组大鼠左侧睾丸组织进行苏木素-伊红染色(Hematoxylin-Eosin Staining,HE)后光镜下观察大鼠睾丸组织形态学改变,取制备好的右侧大鼠睾丸标本在透射电镜(Transmission Electron Microscope,TEM)下观察睾丸组织亚细胞器超微结构。将剩余右侧睾丸组织制备组织匀浆液,检测超氧化物歧化酶(Superoxide,SOD)、丙二醛(Malondialdehyde,MDA)和总抗氧化能力(Total Antioxidant Capacity,T-AOC)氧化应激指标。4.取大鼠血清检测血清中睾酮(Testosterone,T)、黄体生成素(Luteinizing Hormones,LH)、卵泡刺激素(Follicle Stimulating Hormone,FSH)性激素水平。 结果1.各组氧化应激指标比较:暴露于模拟高原低氧环境30天后,高原组(B组)较平原组(A组)SOD活性下降(P<0.01),MDA和T-AOC水平上升(P<0.01)。高原模型组大鼠给予平原环境复氧15天后,阴性对照组(C组)SOD活性上升(P<0.05),MDA和T-AOC无变化(P>0.05)。高原模型大鼠在平原环境给予复方玄驹胶囊后,较阴性对照组(C组)相比,SOD酶活性升高(P<0.01),MDA和T-AOC下降(P<0.05,P<0.01)。高原模型组大鼠在平原环境给予红景天苷后,较阳性对照组(D组)相比,治疗组低剂量组(E组)和治疗组高剂量组(F组)SOD、MDA和T-AOC均无变化(P>0.05),较治疗组低剂量组(E组)相比,治疗组高剂量组(F组)SOD活性上升(P<0.01),MDA和T-AOC均无变化(P>0.05)。 2.各组睾丸组织形态学比较:与平原组(A组)相比,高原组(B组)睾丸组织生精小管内各级生精细胞排列不规则,层数减少,管腔内精子数量稀少,支持细胞空泡化,间质内充满红细胞。阴性对照组(C组)较高原组(B组)相比,生精细胞层数稍增多,管腔内可见精子较少。阳性对照组(D组)较阴性对照组(C组)相比,睾丸组织内部分生精小管内生殖细胞排列较规则,支持细胞空泡较少,部分管腔内可见精子,治疗组E组和F组与阳性对照组(D组)相比,睾丸组织内生精小管和生殖细胞病理变化相似。 3.各组电镜结果示:高原组(B组)生精细胞核固缩,胞质内细胞器液化坏死空泡化,内质网肿胀明显,支持细胞核膜双层膜结构不连续,线粒体明显损伤,胞质内线粒体基质丢失,嵴减少,结构受损,线粒体出现空泡性变样,阴性对照组(C组)生精细胞胞质内部分线粒体有正常形态结构,阳性对照组(D组)、治疗组低剂量组(E组)和治疗组高剂量组(F组)较阴性对照组(C组)生精细胞核形态恢复正常,支持细胞结构完整,细胞间界限较清晰,部分胞质内线粒体数量正常。 4.各组大鼠附睾尾精子悬液质量检测结果示:暴露于模拟高原低氧环境30天后,高原组(B组)较平原组(A组)相比,精子数量、精子存活率和精子总活动率均下降(P<0.01),精子畸形率增高(P<0.05)。高原模型组大鼠给予平原环境复氧15天后,阴性对照组(C组)精子数量和精子存活率上升(P<0.05),精子形态无变化(P>0.05)。高原模型大鼠在平原环境给予复方玄驹胶囊后,较阴性对照组(C组)相比,精子数量和精子存活率上升(P<0.01),精子形态无变化(P>0.05)。高原模型组大鼠在平原环境给予红景天苷后,较阳性对照组(D组)相比,精子质量无变化(P>0.05)。治疗组高剂量组(F组)较治疗组低剂量组(E组)相比,治疗组高剂量组(F组)精子数量上升(P<0.01),其余无变化(P>0.05)。 5.各组大鼠血清性激素检测结果示:暴露于模拟高原低氧环境30天后,高原组(B组)较平原组(A组)T、FSH和LH水平均下降(P<0.01)。高原模型组大鼠给予平原环境复氧15天后,阴性对照组(C组)T、FSH和LH水平无变化(P>0.05)。高原模型大鼠在平原环境给予复方玄驹胶囊后,较阴性对照组(C组)相比T、FSH和LH水平无变化(P>0.05)。高原模型组大鼠在平原环境给予红景天苷后,较阳性对照组(D组)相比,治疗组低剂量组(E组)和治疗组高剂量组(F组)T、FSH和LH水平均无变化(P>0.05)。 结论1.模拟高原低氧环境能够损伤雄性大鼠生殖系统的结构和功能;2.模拟高原低氧环境损伤模型大鼠在得到复氧后生殖系统有一定的修复能力;3.红景天苷(40mg/kg/d)和机体自身修复能力相互叠加能够减轻由于模拟高原低氧环境因素介导的氧化应激反应,从而对模拟高原低氧环境造成的雄性大鼠生殖系统损伤具有治疗作用。