文献类型：学位论文

中文题名：基于MC/PAR-2途径探讨香砂六君子汤改善脾胃虚弱型FD大鼠十二指肠黏膜通透性及低度炎症的机制研究

作者：赵琳娜[1];

第一作者：赵琳娜

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：安耀荣;甘肃中医药大学|成映霞;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：香砂六君子汤;脾胃虚弱型功能性消化不良;十二指肠黏膜通透性;十二指肠低度炎症;MC/PAR-2途径

年份：2023

摘要：目的:MC/PAR-2途径是功能性消化不良(FD)疾病进展的关键分子生物学途径之一,PAR-2受体能够通过调控ERK1/2激酶和NF-κB的活性参与十二指肠黏膜通透性改变以及十二指肠低度炎症的病理进程。本文旨探讨香砂六君子汤通过MC/PAR-2途径改善FD大鼠十二指肠黏膜通透性及低度炎症的作用机制,以期为香砂六君子汤临床治疗FD提供实验基础。方法:1.通过TCMSP获取香砂六君子汤主要成分及对应靶点,运用Gene Cards数据库获取FD疾病靶点;筛选出药物与疾病共同靶点并利用Cytoscape3.7.1软件进行“药物-成分-靶点-疾病”网络构建;采用STRING数据库构建靶点蛋白相互作用(PPI)网络,通过拓扑分析筛选核心靶点;通过GO及KEGG通路富集核心生物作用及相关通路。2.采用综合造模法(碘乙酰胺灌胃+游泳力竭+饥饱失常)构建脾胃虚弱型FD大鼠模型并进行模型验证。模型验证成功后将FD模型大鼠随机分为模型组、色甘酸钠组、香砂六君子汤高、中、低剂量组大鼠,分别每日灌服生理盐水、色甘酸钠(0.072 g/kg)、香砂六君子汤(12 g/kg、6 g/kg、3 g/kg),持续干预2周。检测各组大鼠一般生存状态、体质量、三小时进食量、胃排空率、肠推进率及内脏敏感性;HE染色观察各组大鼠胃、十二指肠的病理结构;酶联免疫分析法(ELISA)检测各组大鼠血清中炎症因子(VCAM-1、IL-6、TNF-α和ICAM-1)及HIS含量;透射电镜观察各组大鼠十二指肠上皮细胞的微观结构;蛋白免疫印迹法(WB)及免疫荧光染色法(IF)检测各组大鼠十二指肠组织中连接蛋白及MC/PAR-2途径关键分子蛋白表达水平。结果:1.网络药理学研究发现:香砂六君子汤与FD共同靶点有151个,PPI网络分析发现,其关键靶点为MAPK1、MAPK14、IL-6等;GO富集得到2198个条目,主要与对活性氧的反应、蛋白酶抑制剂复合物、氧化还原酶活性等方面;KEGG通路富集分析得到203条相关通路,其中主要富集在AGE-RAGE信号通路、MAPK信号通路、TNF信号通路等,多与免疫炎症相关。2.动物实验研究发现:(1)造模结束后:空白组大鼠活动敏捷,被毛光泽顺亮。与空白组相比,造模组大鼠精神倦怠、活动减弱,体质量、三小时进食量、胃排空率及肠推进率显著降低(P<0.05),内脏敏感性显著上升(P<0.05),胃组织病理结果无明显差异而十二指肠组织存在低度炎症。(2)香砂六君子汤干预结束后:(1)空白组大鼠活动正常,饮食正常,被毛浓密有光泽;与空白组比较,模型组大鼠一般生存状态变差,精神倦怠,少食,行动迟缓,被毛干枯毛躁,体质量、三小时进食量、胃排空率及肠推进率显著降低,内脏敏感性升高,且组间差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,各给药组大鼠一般生存情况好转,倦怠萎靡、少食、被毛干枯等情况逐步好转,体质量、三小时进食量、胃排空率及肠推进率显著升高、内脏敏感性下降,且组间差异具有统计学意义(P<0.05)。其中香砂六君子汤高剂量组效果最为明显。(2)各组大鼠胃组织结构均清晰完整,黏膜细胞形态正常,无炎性浸润。空白组大鼠十二指肠组织无明显结构异常,黏膜层、黏膜下层、肌层各组织结构均清晰可见,黏膜绒毛排列整齐,上皮细胞排列紧密,固有层细胞无肿胀、无特殊炎性细胞浸润;模型组大鼠十二指肠结构无明显异常,但出现了黏膜绒毛倒伏、散乱现象,且十二指肠黏膜上皮细胞排列疏松,固有层细胞肿胀,圆形细胞增多,出现炎性浸润;而各给药组大鼠十二指肠黏膜绒毛倒伏散乱现象好转,且上皮细胞排列紧密、固有层细胞肿胀减少,炎性浸润好转。其中香砂六君子汤高剂量组效果最为明显。(3)与空白组相比,模型组大鼠血清中炎性因子(VCAM-1、IL-6、TNF-α和ICAM-1)的含量显著升高,组间差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,色甘酸钠组及香砂六君子汤高剂量组大鼠血清中炎性因子(VCAM-1、IL-6、TNF-α和ICAM-1)的含量显著降低,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。(4)空白组大鼠十二指肠上皮细胞之间连接结构完整、紧密,桥粒存在;与空白组比较,模型组大鼠十二指肠上皮细胞连接结构疏松,间隙宽度增加,桥粒等结构减少,且大鼠十二指肠组织中ZO-1、β-catenin蛋白含量显著降低,组间差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组相比,色甘酸钠组及香砂六君子汤高剂量组组大鼠十二指肠上皮连接结构改善,桥粒增多,且十二指肠组织中ZO-1、β-catenin蛋白含量显著升高,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。(5)与空白组相比,模型组大鼠血清中HIS含量及十二指肠组织中Trypatse、PAR-2、p-NF-κBp65、p-ERK1/2蛋白表达水平显著上升,组间差异具有统计学意义(P<0.05);与模型组比较,色甘酸钠组及香砂六君子汤高剂量组血清中HIS含量及Trypatse、PAR-2、p-NF-κBp65、p-ERK1/2蛋白表达水平那个显著降低,组间差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:香砂六君子汤能够显著改善脾胃虚弱型FD大鼠一般症状,其作用机制可能与调控十二指肠组织中MC/PAR-2途径及下游关键蛋白的表达,改善十二指肠黏膜通透性及低度炎症有关。