文献类型：学位论文

中文题名：当归红芪超滤物对X线辐射致H9c2细胞损伤的保护作用及其机制研究

作者：孔姗姗[1];

第一作者：孔姗姗

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：邱勇玉;甘肃中医药大学|赵信科;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：当归红芪超滤物;放射性心肌损伤;H9c2细胞;TNF-α/CTRP9通路

年份：2021

摘要：目的: 采用网络药理学的方法预测当归红芪超滤物防治放射性心脏病(Radiation-induced Heart Disease,RIHD)的潜在作用机制,并在体外细胞培养的条件下,以大鼠心肌细胞(H9c2)为研究对象,进一步探讨当归红芪超滤物通过调控TNF-α/CTRP9信号通路对放射性心肌损伤的保护作用,为当归红芪超滤物防治RIHD提供实验依据。 方法: (1)用网络药理学方法预测当归、红芪活性成分作用靶点;利用Gene Cards数据库筛选RIHD靶点;运用R语言,Cytoscape 3.7.2软件和STRING进行靶点蛋白的可视化分析;最后结合基因本体(GO)富集分析、京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析以阐释当归红芪超滤物防治RIHD的分子作用机制。 (2)建立X线辐射H9c2细胞模型,将H9c2细胞随机分为空白组、阴性对照组、模型组,ELISA检测cTnT、c TnⅠ及CRP表达;Western Blot和RT-PCR测定细胞中TNF-α和CTRP9的表达;免疫荧光染色检测TGF-β和α-SMA蛋白的表达。 (3)建立X线辐射H9c2细胞模型,并采用大鼠灌胃方法制备含药血清,将H9c2细胞随机分为空白组、模型组、盐酸贝那普利组、当归红芪超滤物组、盐酸贝那普利+当归红芪超滤物组;ELISA检测cTnT、c TnⅠ及CRP表达;Western Blot和RT-PCR测定细胞中TNF-α和CTRP9的表达;免疫荧光染色检测TGF-β和α-SMA蛋白的表达。 结果: (1)网络药理学:获得17个有效生物活性成分,得到43个当归红芪超滤物作用RIHD的相关靶点。 (2)通过ELISA结果发现辐射后模型组与空白组比较,cTnT、cTnI、CRP的含量明显升高(P<0.01);而药物干预48 h后盐酸贝那普利组、当归红芪超滤物组和盐酸贝那普利+当归红芪超滤物组与模型组比较降低(P<0.05);阴性对照组和空白组无明显差异(P>0.05);盐酸贝那普利组、当归红芪超滤物组和盐酸贝那普利+当归红芪超滤物组组间无明显差异(P>0.05); (3)通过RT-PCR结果发现辐射后模型组与空白组比较,TNF-α及CTRP9的表达含量明显升高(P<0.01);而药物干预48 h后盐酸贝那普利组、当归红芪超滤物组和盐酸贝那普利+当归红芪超滤物组与模型组比较降低(P<0.05);阴性对照组和空白组无明显差异(P>0.05);盐酸贝那普利组、当归红芪超滤物组和盐酸贝那普利+当归红芪超滤物组组间无明显差异(P>0.05); (4)通过免疫荧光结果发现,模型组与空白组比较,α-SMA和TGF-β表达升高(P<0.01);而与模型组比较,盐酸贝那普利组、当归红芪超滤物组和盐酸贝那普利+当归红芪超滤物组的α-SMA及TGF-β的蛋白表达下调(P<0.05);阴性对照组和空白组无明显差异(P>0.05);盐酸贝那普利组、当归红芪超滤物组和盐酸贝那普利+当归红芪超滤物组组间的无明显差异(P>0.05)。 (5)通过Western Blot结果发现,模型组与空白组比较,TNF-α、CTRP9表达明显升高(P<0.01);而与模型组比较,盐酸贝那普利组、当归红芪超滤物组和盐酸贝那普利+当归红芪超滤物组的TNF-α、CTRP9的蛋白表达下调(P<0.05);而阴性对照组和空白组无明显差异(P>0.05);盐酸贝那普利组、当归红芪超滤物组和盐酸贝那普利+当归红芪超滤物组组间无明显差异(P>0.05)。 结论: (1)发现当归红芪超滤物具有多成分、多靶点、多途径的作用特点,为进一步研究其防治RIHD的生物活性成分和作用机制提供一定的依据。 (2)当归红芪超滤物可通过下调TNF-α/CTRP9信号通路相关因子的表达,达到保护X线辐射致H9c2细胞损伤的目的。因此,当归红芪超滤物可用于防治RIHD。