文献类型：学位论文

中文题名：lncRNA在甲状腺乳头状癌中的表达及熊果酸的干预作用研究

作者：何亚丽[1];

第一作者：何亚丽

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：伊琳;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：长链非编码RNA;甲状腺乳头状癌;LINC01089;熊果酸

年份：2021

摘要：目的:为了探讨lncRNA与甲状腺乳头状癌的关系及熊果酸对PTC中差异基因表达的影响,本研究以PTC组织为研究对象,通过转录组测序技术筛选差异表达的lncRNA并初步验证,进一步利用熊果酸对筛选的差异表达基因进行干预,从m RNA与蛋白水平分析熊果酸对PTC lncRNA及相关靶基因的干预作用,从分子层面探讨熊果酸抗PTC的机制。 方法:通过转录组测序技术构建PTC的lncRNA表达谱,筛选差异表达的lncRNA并预测其靶基因,通过GO和KEGG进行靶基因及相关信号通路富集分析,同时通过qRT-PCR对筛选的差异lncRNA进行初步验证;进一步使用不同浓度的熊果酸(10、20、40μmol/L)干预TPC-1细胞,通过CCK8法、显微镜观察、划痕实验、transwell迁移和侵袭实验检测熊果酸对TPC-1细胞增殖、迁移和侵袭的影响,通过qRT-PCR及Western blot检测熊果酸对LINC01089及其靶基因表达的影响。 结果: (1)共检测到lncRNA的总数为30403个,其中已知lncRNA 16017个,新的lncRNA14386个;27760个m RNA,其中已知m RNA 19647个,新m RNA 8113个。以|log2(FC|)≥2且FDR<0.05作为筛选标准,共111个差异表达的lncRNA;29个差异表达的m RNA;深度分析以|log2(FC)|>8且FDR<0.05为筛选标准,显著差异表达的lncRNA有18个(表2),上调5个,下调13个。 (2)GO富集分析显示:差异lncRNA的靶基因主要参与维生素代谢,MAPK活性的激活,自噬等生物学过程。KEGG通路分析发现差异表达靶基因主要与“焦粘连”“c AMP信号通路”“oxylocin信号通路”“wnt信号通路”等传导途径相关。 (3)qRT-PCR结果显示LINC01089和MSTRG.277779.1在甲状腺乳头状癌TPC-1细胞中表达下调。 (4)增殖实验结果显示:熊果酸能抑制TPC-1细胞的增殖,当熊果酸浓度为10-40μmol/L时,在12h-36h内随着浓度的增加和作用时间的延长,细胞的抑制效应逐渐增强,差异具有统计学意义(P<0.05)。 (5)显微镜观察可见:TPC-1组细胞正常生长,熊果酸处理24h后,细胞生长缓慢,随着熊果酸浓度的增高,细胞贴壁不稳,出现漂浮细胞,体积逐渐变小,细胞间隙增大,形态不规则,胞质出现空泡,核浓缩等细胞凋亡的形态学改变。 (6)水平迁移结果显示:与TPC-1细胞组相比,各熊果酸(10、20、40μmol/L)组细胞迁移率明显降低,有显著性差异(P<0.01),40μmol/L时最为明显。与0h组相比,12和24 h后细胞迁移率增高,且随时间的延长迁移率逐渐增高,有显著性差异(P<0.01)。 (7)垂直迁移和侵袭结果显示:与TPC-1细胞组相比,熊果酸(10、20、40μmol/L)组穿膜细胞数量明显减少,呈明显浓度依赖性,具有显著性差异(P<0.01)。 (8)qRT-PCR结果显示:随着熊果酸(10、20、40μmol/L)浓度的增高,LINC01089的表达量逐渐增高(P<0.05),RHOFm RNA、HPDm RNA的表达量逐渐降低(P<0.05)。 (9)Western blotting结果显示:随着熊果酸(10、20、40μmol/L)浓度的增高,RHOF、HPD蛋白的表达量逐渐降低(P<0.05)。 结论: (1)LINC01089和MSTRG.277779.1在PTC中低表达,可能与PTC的发生发展具有相关性。 (2)熊果酸对TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭具有抑制作用,且呈一定的浓度和时间依懒性。 (3)熊果酸能抑制TPC-1细胞的增殖、迁移和侵袭,其机制可能与促进LINC01089的表达,抑制RHOF的表达有关。 (4)熊果酸可能通过调节LINC01089及其靶基因RHOF的表达影响PTC的发生、发展。