文献类型：学位论文

中文题名：IL-36α在HCC肿瘤微环境中发挥促瘤生物学功能的机制探究

作者：宋艳梅[1];

第一作者：宋艳梅

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：陈彻;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：肝细胞癌;IL-36α;预后;生物标志物

年份：2023

摘要：目的探究肝癌患者循环血清、组织及体外细胞系中IL-36α的表达,为阐明IL-36α作为早期灵敏的生物学标志物对肝细胞癌诊断提供灵敏可靠的指标。采用生物信息学方法分析其上下游基因的表达并预测相关靶基因,分析IL-36α的表达与miR-27b-3p的调控作用相关,为提高肝细胞癌患者的预后生存率彰显独特意义。进一步探究IL-36α通过细胞焦亡对肝细胞癌潜在的分子调控机制,为肝癌的新型免疫治疗策略提供基础。方法本研究分别收集肝炎、肝硬化、肝癌患者体内循环血清为实验组,健康体检者为对照组,ELISA试剂盒检测各组血清中IL-36α的表达,并与同一患者AFP、CEA值做统计学分析;收集肝癌患者癌组织及癌旁组织,ELISA试剂盒检测各组细胞因子IL-36α的表达,HE染色分析各组织间的分化差异程度;常规方法培养人肝癌细胞株HepG2、Huh7和正常人肝细胞株L02,ELISA试剂盒检测各组细胞中IL-36α的表达,采用500、250、125、62.5和0 ng/m L IL-36α分别干预三株细胞后,使用CCK8检测各组细胞活力,最终选取500 ng/m L IL-36α的浓度干预HepG2后做细胞划痕实验,分别在0 h、24 h、48 h后镜下采集图像并用Image J软件分析。采取相同浓度IL-36α干预HepG2细胞24 h后,使用ELISA试剂盒检测细胞焦亡产物IL-18和IL-1β的释放量,分析IL-36α与细胞焦亡的潜在机制。基于生物信息学,分析IL-36α上下游基因的表达,并说明IL-36α为探究肝细胞癌患者的预后生存率提供了科学依据。结果1.体内循环血清中AFP与CEA的差异表达仅发生在癌症中晚期阶段,但IL-36α却在慢性肝炎患者血清中存在高表达。2.体内组织HE染色同ELISA结果显示IL-36α在高分化HCC组织存在中高表达,在中分化组织次之,低分化HCC组织中表达最低。随着分化程度恶化其表达逐渐呈下降趋势。因此分析发现,IL-36α的低表达可能与组织学分化程度、肿瘤血管侵犯具有显着相关。3.根据生物信息学分析,受体IL-36R在正常组织中高表达,而在肝细胞癌中低表达。发现IL-36α受miR-27b-3p负相调控,且IL-36α随着HCC的进展逐渐降低。因此miRNA-27b-3p的异常表达可以用来预测IL-36α可以作为一种潜在的生物标志物,预防癌症相关的死亡。4.体外实验发现IL-36α在高分化的肝癌细胞(Huh7)中高表达,而在低分化的肝癌细胞(HepG2)中低表达,体外实验结果同体内实验结果相一致。通过对肝癌细胞(HepG2)体外干预IL-36α后检测细胞焦亡产物IL-18和IL-1β的表达,发现与干预组相比,空白对照组IL-18和IL-1β的表达降低,说明IL-36α可能对HepG2细胞的焦亡产生了抑制作用,并通过抑制细胞焦亡来介导HCC的免疫应答,这一结果为肝癌中诱导IL-36α表达的新型免疫治疗策略提供了基础。结论体内IL-36α在疾病发展早期的高表达预示着IL-36α有可能作为HCC早期诊断灵敏指标为肝细胞癌的诊断提供提供灵敏可靠的生物学标志物。IL-36α随着分化程度恶化其表达逐渐呈下降趋势,其低表达可能与组织学分化、肿瘤血管侵犯具有相关性,表明IL-36α在肝细胞癌中可能扮演着促肿瘤细胞因子。生物信息学结果分析其受体IL-36R及mRNA(CXCL1)的低表达表明HCC的总生存期更好、更长。通过体外干预IL-36α可能对HepG2细胞生存、增殖、迁移以及细胞焦亡有抑制作用。我们的数据表明IL-36α可能是治疗的潜在靶点、作为HCC新的预后标志物及可靠的生物学指标,旨在通过局部应用细胞因子IL-36α对肝细胞癌的诊疗提供可靠的科学依据。