文献类型：学位论文

中文题名：艾灸联合生肌玉红膏对压疮大鼠损伤修复及PI3K/Akt/mTOR信号通路影响的实验研究

作者：陈若岚[1];

第一作者：陈若岚

机构：[1]甘肃中医药大学;

第一机构：甘肃中医药大学

导师：丁劲;甘肃中医药大学

授予学位：硕士

语种：中文

中文关键词：压疮;损伤修复;艾灸;生肌玉红膏;PI3K/Akt/mTOR信号通路

年份：2024

摘要：目的:建立压疮大鼠模型,观察艾灸联合生肌玉红膏对压疮大鼠皮肤损伤修复的效果;以PI3K/Akt/mTOR信号通路为研究切入点,通过对相关蛋白表达水平的测定,探讨艾灸联合生肌玉红膏在压疮大鼠损伤修复过程中的可能性机制,为压疮及慢性难愈性创面的治疗、护理提供重要的理论和实验依据。方法:将36只SPF雄性SD大鼠先进行适应性饲养一周,采用定制压疮造模装置,建造缺血再灌注损伤的3期压疮大鼠模型,判定造模成功后,将36只模型大鼠随机分为模型组、艾灸组、生肌玉红膏组、艾灸联合生肌玉红膏组,每组9只,用Mark笔做好标记。各组均按照清创、用药、包扎的顺序进行处理。模型组:在清创后进行碘伏常规消毒包扎处理,1次/d,干预14d;艾灸组:采用回旋灸,以压疮损伤创面为中心,施灸温度控制在(45±1)℃,10min/次,1次/d,干预14d;生肌玉红膏组:创面无菌生理盐水清洗清创后,取与创面等面积的生肌玉红膏油纱条覆盖并用无菌敷料包扎固定,换药1次/d,连续14d;艾灸联合生肌玉红膏组:艾灸操作同前,后进行生肌玉红膏油纱条覆盖创面并包扎,换药1次/d,连续14d。在连续干预后第3、7、14d分别留取标本,测量、计算各组大鼠的创面愈合率和愈合时间,动态观察创面愈合情况;进行HE染色检测压疮创面组织病理形态学变化;采用免疫组化技术和Western Blot检测创面组织中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达情况。采用SPSS25.0对数据进行统计分析。结果:(1)创面愈合情况:各组大鼠的创面愈合率均随着各时间点的增加呈逐渐升高趋势,除干预后第3d,艾灸联合生肌玉红膏组与生肌玉红膏组愈合率无统计学意义外(P>0.05),干预后第7d、14d,艾灸组、生肌玉红膏组、艾灸联合生肌玉红膏组创面愈合率均高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),其中艾灸联合生肌玉红膏组的愈合率高于艾灸组和生肌玉红膏组(P<0.05)。在创面愈合时间上,艾灸联合生肌玉红膏组所需的愈合时间9.22±1.30天,也明显短于其他三组所需时间,而生肌玉红膏组和艾灸组两组愈合时间基本相同(P=0.05)。(2)创面组织HE染色病理学检测:干预后第3d,模型组真皮层大面积坏死,间质水肿明显,未见新生毛细血管;生肌玉红膏组、艾灸联合生肌玉红膏组皮下炎症明显减轻,坏死区域面积较小,炎性细胞浸润,可见少量新生毛细血管和成纤维细胞;艾灸组新生毛细血管和成纤维细胞少见。干预后第7d,艾灸组、生肌玉红膏组、艾灸联合生肌玉红膏组压疮损伤程度较模型组明显改善,炎症细胞浸润明显减轻,可见部分血管内皮细胞及成纤维细胞;模型组可见大量炎性细胞浸润,少量新生毛细血管,肉芽组织开始出现。干预后第14d,模型组损伤程度有所改善,但表皮层尚未修复完成,仍可见少量炎症细胞浸润,成纤维细胞及新生毛细血管;艾灸联合生肌玉红膏组创面修复基本完成,炎性细胞、成纤维细胞减少,纤维细胞增多,真皮层含有大量排列紧密的胶原纤维,毛细血管萎缩;艾灸组与生肌玉红膏组治疗效果基本相当,炎性细胞、成纤维细胞减少,真皮层仍有少量的胶原纤维。(3)免疫组化检测结果:干预后第3、7、14 d,各组大鼠创面组织p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达量均呈现升高-降低趋势,高峰出现在干预后第7d。(1)p-PI3K:在干预后第3d、7d、14d,艾灸联合生肌玉红膏组蛋白表达量高于生肌玉红膏组、艾灸组、模型组,差异均有显著统计学意义(P<0.01)。模型组表达为各组中最低,但在干预后第3d,与艾灸组、生肌玉红膏组比较,差异均无统计学意义(P>0.05);艾灸组与生肌玉红膏组表达量在干预后第3d、14d比较,差异无统计学意义(P>0.05)。(2)p-Akt:干预后第3d,生肌玉红膏组、艾灸联合生肌玉红膏组表达量均高于模型组,差异有统计学意义(P<0.05),模型组、生肌玉红膏组分别与艾灸组比较,结果均无统计学意义(P>0.05);艾灸联合生肌玉红膏组与艾灸组差异有统计学意义(P<0.05);干预后第7d,艾灸联合生肌玉红膏组高于其余各组(P<0.05),其中模型组、艾灸组比较,无统计学意义(P>0.05);干预后第14d,各组表达量均下降,模型组表达量为各组中最低,与其他三组比较,结果均有显著差异(P<0.01)。(3)p-mTOR:艾灸联合生肌玉红膏组在干预后第3d,与生肌玉红膏组比较差异不显著(P=0.05),在干预后第7d、14 d,与其余各组比较,均有统计学意义(P<0.05);但艾灸组与生肌玉红膏组在干预后第14d比较差异无统计学意义(P>0.05)。(4)Western Blot检测结果:干预后第3、7、14 d,各组大鼠创面组织中p-PI3K、p-Akt、p-mTOR的蛋白表达水平呈现先升高后下降的“单峰”趋势,高峰出现在干预后第7d。艾灸联合生肌玉红膏组p-PI3K、p-Akt、p-mTOR蛋白表达水平在干预后第7d、14d都明显高于其余各组,差异有统计学意义(P<0.05),艾灸联合生肌玉红膏组与生肌玉红膏组的p-PI3K蛋白表达水平在干预后第3d时,差异无统计学意义(P>0.05),艾灸组与生肌玉红膏组各蛋白表达水平在干预后第14d,差异无统计学意义(P>0.05)。除模型组各时间点蛋白表达水平差异不显著外(P>0.05),其余三组各时间点蛋白表达水平差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:(1)艾灸联合生肌玉红膏可缩小压疮损伤创面,提高创面愈合率,缩短创面愈合时间。(2)在创面愈合过程中,艾灸联合生肌玉红膏对压疮创面组织中的炎性细胞浸润、创面全层皮肤的生长等均有明显的改善作用。(3)艾灸与生肌玉红膏联合干预,对于压疮创面的修复有着较好的药效学作用,其促愈机制可能与调节PI3K/Akt/mTOR信号通路上的相关蛋白表达有关,其通过上调PI3K/Akt/mTOR信号通路上的相关蛋白,激活PI3K/Akt/mTOR信号通路,减轻压疮损伤创面炎症反应,促进创面肉芽组织生长,加快创面愈合进程。